Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Hộp Điện Trong Công Nghệ DNA part 11

Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 11', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | Kết quả cho thấy các đoạn lớn được phân tách tốt hơn ở gel 1 trong khi các đoạn nhỏ thích hợp với gel 2 . Hình 2.3. Điện di các mẫu DNA giống nhau ở các nồng độ agarose khác nhau. A 1 B 1 5 và C 2 . 1.3. Cấu hình của DNA Các DNA dạng vòng đóng form-I vòng đứt form-II và mạch thẳng form-III có cùng một khối lượng phân tử sẽ dịch chuyển trên agarose gel ở các tốc độ khác nhau. Nhìn chung DNA của các plasmid mạch vòng dịch chuyển nhanh hơn DNA của plasmid cùng loại nhưng có dạng mạch thẳng. Hầu hết plasmid mạch vòng chứa ít nhất hai dạng DNA có cấu trúc không gian khác nhau là dạng vòng đóng siêu xoắn và vòng đứt. Hình 2.4 minh họa kết quả điện di với plasmid mạch vòng bên trái và plasmid cùng loại mạch thẳng ở bên phải. Hình 2.4. Điện di các plasmid có cấu hình khác nhau 1.4. Thành phần base và nhiệt độ Tập tính điện di của DNA trong agarose gel không bị ảnh hưởng rõ rệt bởi thành phần base của DNA hoặc nhiệt độ mà ở đó gel được chạy. Trong agarose gel tính linh động điện di tương đối của các đoạn DNA có kích thước khác nhau không thay đổi trong khoảng từ 4oC đến 30oC. Nói chung agarose gel thường được chạy ở nhiệt độ phòng. 2. Phương pháp điện di agarose gel 2.1. Đệm pH Một số đệm điện di thích hợp cho DNA sợi đôi thường được dùng là Tris-acetate-EDTA TAE Tris-borate-EDTA TBE và Tris-phosphate-EDTA TPE ở nồng độ khoảng 50 mM và pH 7 5-7 8 Bảng 2.2 . Thường do thói quen TAE được sử dụng nhiều nhất nhưng khả năng đệm của nó lại thấp. Đệm TBE và TPE đều có khả năng hòa tan tốt các đoạn DNA và có khả năng đệm cao hơn một cách rõ rệt. Các đoạn DNA sẽ dịch chuyển với các tốc độ hơi khác nhau một chút trong ba loại đệm trên do sự khác nhau về cường lực ion của đệm. Đệm không những thiết lập một giá trị pH mà còn cung cấp các ion để hỗ trợ cho độ dẫn conductivity . Nếu chúng ta dùng nước thay vì là đệm trong quá trình điện di thì sẽ không có sự dịch chuyển cần thiết của DNA trong gel. Ngược lại nếu sử dụng đệm nồng độ đậm đặc ví dụ dung dịch stock X10 thì nhiệt độ trong gel