Tham khảo tài liệu 'các phương pháp phân tích ngành công nghệ lên men part 7', khoa học tự nhiên, công nghệ sinh học phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | . HOẠT ĐỘ ENZYM INVECTAZA p-FRUCTOZIDAZA 1. Nguyên tắc Phương pháp dựa trên cơ sở thuỷ phân đường sacaroza bởi enzym có trong dịch chế phẩm nghiên cứu thành glucoza và fructoza. Xác định lượng đường khử tạo thành sẽ tính được hoạt độ enzym. Đường khử trong môi trường kiềm nóng sẽ khử axit 2-hydroxy 3 5-dintrobenzoĨG hay axit 3 5-dinitrosalicylic 3 5-DNS màu vàng thành axit 2-hydroxy 3-amino 5-nitrobenzoic màu đỏ da cam. Đo độ hấp thụ ánh sáng ở bước sóng X - 575 nm của dung dịch sau phản ứng sẽ xác định được lượng đường khử tạo thành. Đơn vị hoạt đô invectaza là lượng enzym xúc tác thuỷ phân được một micro mol sacaroza ở 25 c trong thời gian một phút. 2. Hoá chát và địch chiết enzym - Dung dịch đệm axetat O 1M pH 4 7. Phối trộn 529 ml dung dịch axit axetic IM với 471 ml dung dịch axetat natri O 1M nhận được 1 lít dung dịch đệm. Kiểm tra lại trên máy pH met. - Dung dịch phản ứng kiềm ưong 3 5-DNS. Hoà tan nóng 10 g axit 2-hydroxy 3 5-dinitrobenzoic trong 200 ml dung dịch NaOH 2M dung dịch A . Hoà tan 300 g natrì kali tartrat trong 500 ml nước cất dung dịch B . Phối trộn hai dung dịch A và dung dịch B bổ sung nước cất tới 1 lít và lọc. - Dung dịch sacaroza 1 M. - Dung dịch đường nghịch đảo 5 mM Phối trộn hai dung dịch glucoza 5 mM và dung dịch fructoza 5 mM theo tỷ lệ 1 1 v v . - Chiết rút enzym Cân 10 g nấm men cho vào 20 ml dung dịch NaHCO3 0 lM hay dung dịch đệm pyrophosphat 66 mM pH 8 5. Nghiền tê bào bằng máy nghiền trong thời gian 2 phú . Để yên hỗn hợp ưong thời gian 24 giờ ít nhất một đêm ở 40 C hay ở nhiệt độ môi trường . Ly tâm tách xấc tế bào thu hồi dung dịch chứa enzym với tốc độ 4000 vòng phút trong thời gian 15 phút. 202 3. Tiến hành - Mẫu thí nghiệm Hút 100 pl dung dịch sacaroza IM và 350 11 dung dịch đệm axetat pH 4 7 cho vào cuvet 2 ml đặt vào bình ổn nhiệt có nhiệt độ 25 c trong thời gian 5 phút sau đó bổ sung 50 pl dịch chiết enzym nếu cần phải pha loãng dịch chiết enzym . Lắc mạnh và giữ nguyên ở nhiệt độ này trong thời gian đúng 20 phút. Bổ
