Chuyển gen bar kháng thuốc diệt cỏ glufosinate trên cây đậu xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek) bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens - Các giống đậu xanh được sử dụng trong thí nghiệm là giống TN 182 của Công ty TNHH-TM Trang Nông, giống HL 89-E3 của Công ty cổ phần giống cây trồng Nha Hố. | 1 ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÔI TRƯỜNG THỰC HÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC CÂY TRÒNG Oncogenic genes Cytokinin production Opine synthesis Auxin production Conjugative transfer Virulence region T-DNA border Left T-DNA border Ti plasmid Origin of replication T-region Octopyne type THÁNG 12 2007 Lưu hành nội bộ 2 NỘI DUNG THỰC HÀNH Chuyển gen bar kháng thuốc diệt cỏ glufosinate trên cây đậu xanh Vigna radiata L. Wilczek bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens - Các giống đậu xanh được sử dụng trong thí nghiệm là giống TN 182 của Công ty TNHH-TM Trang Nông giống HL 89-E3 của Công ty cổ phần giống cây trồng Nha Hố. - Vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens chủng EHA101pIB-GUS do Hans-Jorg Jacobsen thiết kế mang plasmid pGII0229 Trgus cp148 luc plasmid này mang gen gusA gen nptlI và gen bar với promoter là CaMV 35S và terminator là nos poly-A. Hình 1. Plasmid pGII0229 Trgus cp148 luc 3 PHẦN 1. KHỬ TRÙNG HẠT CHUẤN BỊ MÔI TRƯỜNG I. Vât liệu a. Khử trùng hạt - Mẫu hạt. - Dụng cụ cấy mô pince dao cấy đèn cồn. - Hóa chất khử trùng Cồn 70o cồn 96 o Javel kháng sinh Tetracilin. - Nước cất tiệt trùng b. Chuẩn bị môi trường Môi trường tiền nuôi cấy pre-culture medium tạo điều kiện cho mô thích nghi với môi trường nuôi cấy. Môi trường ủ inoculation medium môi trường tạo điều kiện cho vi khuẩn xâm nhập vào mô thực vật. Môi trường đồng nuôi cấy co-culture medium môi trường thuận lợi cho sự phát triển của mô và vi khuẩn. II. Cách tiến hành a. Khử trùng hạt theo quy trình sau đây - Rửa hạt bằng nước tiệt trùng 3 lần mỗi lần 5 phút . - Rửa hạt bằng cồn 960 3 lần mỗi lần 5 phút . - Rửa bằng nước tiệt trùng 1 lần. - Rửa bằng nước javel đậm đặc 3 lần mỗi lần 10 phút . - Rửa bằng nước cất tiệt trùng 1 lần. - Rửa hạt bằng kháng sinh 500mg l Tetraciclin trong 5 phút. - Rửa bằng nước tiệt trùng 1 lần. - Ngâm hạt bằng nước tiệt trùng trong 1 giờ. - Ngâm hạt qua đêm. b. Chuẩn bị môi trường Môi trường tiền nuôi cấy pre-culture medium Môi trường B5 lỏng 1 mg l BA Thành phần môi
