Kỹ thuật gen gồm nhều giai đoạn nhằm biến đổi cấu trúc gen, tạo gen mới, đưa các gen tái tổ hợp vào tế bào chủ để thu nhận các prôtêin tái tổ hợp, hoặc nghiên cứu cấu trúc bộ gen, lập bản đồ gen. | Chuyên đề công nghệ sinh học-----------------------------Phạm Việt Hà Cao Học K18 II . NGUYÊN LÍ Kỹ thuật GEN 1. Các bước chủ yếu của kỹ thuật gen Kỹ thuật gen gồm nhều giai đoạn nhằm biến đổi cấu trúc gen tạo gen mới đưa các gen tái tổ hợp vào tế bào chủ để thu nhận các prôtêin tái tổ hợp hoặc nghiên cứu cấu trúc bộ gen lập bản đồ gen. Kỹ thuật gen gồm các bước cơ bản sau a. Chuẩn bị gen cần tách dòng Gen cần tách dòng đoạn ADN insert có thể được chuẩn bị bằng phương pháp tách chiết ADN ARN từ sinh vật mang nguồn gen tự nhiên hoặc tổng hợp nhân tạo. Tách chiết ADN ARN từ sinh vật mang nguồn gen tự nhiên tách chiết plasmid từ vi khuẩn. Tinh sạch và chọn lọc để thu được các gen cần tách dòng. Sử dụng kỹ thuật nhân gen PCR để nhân gen cần thiết lên một số lượng lớn các bản sao đảm bảo một lượng ADN ARN cần thiết. Tổng hợp đoạn ADN nhân tạo trên cơ sở đã biết các trình tự đặc hiệu hoặc trình tự axitamin trong chuỗi polipeppit . Dùng kỹ thuật tổng hợp nhân tạo đoạn oligonuclêotit mạch đơn và nhân gen PCR để tạo số lượng các đoạn ADN nhân tạo đủ lớn. b. Tạo vectơ tái tổ hợp Dựa vào đặc điểm của gen cần tách dòng để lựa chọn loại vectơ và enzim giới hạn phù hợp. Gồm Cắt ADN của tế bào cho chứa gen cần chuyển và ADN của plasmid cùng một loại enzim cắt giới hạn enzim này sẽ cắt hai mạch đơn của phân tử ADN ở vị trí nuclêôtit xác định trình tự nhận biết tạo ra các đầu dính có trình tự nuclêôtit bổ sung. Trộn ADN của tế bào cho với ADN plasmid đã cắt hở các đầu dính bắt cặp bổ sung với nhau nhờ enzim nối ligaza tạo liên kết photphođieste làm liền mạch ADN. Plasmid mang gen lạ gọi là ADN tái tổ hợp. Hình . Sơ đồ các bước chủ yếu của kỹ thuật gen Trang 1 Chuyên đề công nghệ sinh học--------------------------------Phạm Việt Hà Cao Học K18 c. Biến nạp vectơ tái tổ hợp vào tế bào chủ Sử dụng các phương pháp biến nạp khác nhau sốc nhiệt xung điện bắn gen. để đưa các vectơ tái tổ hợp vào tế bào chủ. Tạo môi trường thích hợp để vectơ tái tổ hợp tồn tại và được nhân lên cùng tế bào .
