Real-time PCR là một phương pháp pcr mới. nó kiểm soát lượng huỳnh quang giải phóng ra trong phản ứng từ đó có thể biết được lượng sản phẩm PCR trong từng thời điểm (chu kỳ) của quá trình khuếch đại, trái ngược vơí PCR truyền thống chỉ biết được lượng sản phẩm được khuếch đại ở thời điểm cuối cùng của phản ứng khuếch đại | CHƯƠNG XIII CÔNG NGHỆ GIÁM SÁT VI SINH VẬT VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức phân tử Kỹ thuật PCR Kỹ thuật kiểm tra enzyme vi sinh vật Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức tế bào Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật phát quang Kỹ thuật kiểm tra vi khuẩn đánh giá chất lượng nước Nguyên tắc Dựa trên sự khuếch đại một trình tự gene đích Nguyên lý của real-time PCR Real-time PCR là một phương pháp pcr mới. nó kiểm soát lượng huỳnh quang giải phóng ra trong phản ứng từ đó có thể biết được lượng sản phẩm PCR trong từng thời điểm (chu kỳ) của quá trình khuếch đại, trái ngược vơí PCR truyền thống chỉ biết được lượng sản phẩm được khuếch đại ở thời điểm cuối cùng của phản ứng khuếch đại Dựa trên nguyên tắc kháng thể - kháng nguyên Nguyên tắc: Dựa vào sự phát hiện ATP thông qua enzyme luciferase sự phát sáng Phát hiện nhanh Nhạy vì có thể phát hiện 1 pg ATP tương ứng với 1000 tế bào vi khuẩn Dễ bị dương tính giả Chi phí cao Kỹ thuật MPN Kỹ thuật màng lọc Viết . | CHƯƠNG XIII CÔNG NGHỆ GIÁM SÁT VI SINH VẬT VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức phân tử Kỹ thuật PCR Kỹ thuật kiểm tra enzyme vi sinh vật Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức tế bào Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật phát quang Kỹ thuật kiểm tra vi khuẩn đánh giá chất lượng nước Nguyên tắc Dựa trên sự khuếch đại một trình tự gene đích Nguyên lý của real-time PCR Real-time PCR là một phương pháp pcr mới. nó kiểm soát lượng huỳnh quang giải phóng ra trong phản ứng từ đó có thể biết được lượng sản phẩm PCR trong từng thời điểm (chu kỳ) của quá trình khuếch đại, trái ngược vơí PCR truyền thống chỉ biết được lượng sản phẩm được khuếch đại ở thời điểm cuối cùng của phản ứng khuếch đại Dựa trên nguyên tắc kháng thể - kháng nguyên Nguyên tắc: Dựa vào sự phát hiện ATP thông qua enzyme luciferase sự phát sáng Phát hiện nhanh Nhạy vì có thể phát hiện 1 pg ATP tương ứng với 1000 tế bào vi khuẩn Dễ bị dương tính giả Chi phí cao Kỹ thuật MPN Kỹ thuật màng lọc Viết tắt: Most Probably Number Dựa trên nguyên tắc pha loãng tới hạn Mẫu được pha thành một dãy thập phân liên tiếp và mẫu được đưa vào môi trường thích hợp Ủ và đọc số ống dương tính Tra bảng Mac – crady tính toán số lượng MẪU PHA LOÃNG LSB BGBL EC broth EMB IMViC Coliforms 370C/24h Coliform chịu nhiệt 440C/24h Trypton 440C/24h Kovac’s Feacal Coliform PHA LOÃNG 370C/24h + + + + + + - - - 10-1 10-2 10-3 2 1 1 Tra bảng 370C/24h PHA LOÃNG 370C/24h + + + + + + - - - 10-1 10-2 10-3 Tra bảng PHA LOÃNG 370C/24h + + + + + + - - - 10-1 10-2 10-3 PHA LOÃNG 370C/24h + + + + + + - - - 10-1 10-2 10-3 Sử dụng để định lượng VSV trong các mẫu lỏng như nước sinh hoạt, nước thải, sữa Sử dụng màng lọc vô trùng có kích thước nhỏ (0,27 m và 0,45 m) Có 2 loại: Bằng nhựa Bằng thủy tinh Coliforms tổng số Enterobacteria Và tùy theo các chỉ tiêu phân tích mà ta sử dụng các loại môi trường thích hợp Một số thao tác khi sử dụng bộ lọc vi .
