Môi trường để nuôi cấy mô và tế bào thực vật có chứa đường, vitamin, muối khoáng rất thích hợp cho các loại nấm và vi khuẩn phát triển. Do tốc độ phân bào của nấm và vi khuẩn lớn hơn rất nhiều so với tế bào thực vật, nếu trong môi trường nuôi cấy chỉ nhiễm một vài bào tử nấm hoặc vi khuẩn thì chỉ sau vài ngày đến một tuần, toàn bộ bề mặt môi trường và mô nuôi cấy sẽ phủ đầy một hoặc nhiều loại nấm và vi khuẩn. Thí nghiệm phải bỏ đi vì trong điều kiện này mô nuôi. | Thí nghiệm Sinh học phân tử Biên soạn Lê Lý Thuỳ Trâm BÀI 1 MỞ ĐẦU 1. CÁC THIẾT BỊ CƠ BẢN CỦA MỘT PHÒNG THÍ NGHIỆM NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT a. Phòng rửa và cất nước - Máy cất nước 1 lần - Máy cất nước 2 lần b. Phòng hấp - sấy - Autoclave - Tủ sấy 60 - 200 0C c. Phòng chuẩn bị môi trường - Cân phân tích chính xác đến 0 0001 g - Cân kỹ thuật chính xác đến 0 01 g - pH k ế - Máy khuấy từ - Tủ lạnh - Lò vi sóng microwave d. Phòng thao tác nuôi cấy - Tủ cấy vô trùng laminar - Quạt thông gió - Đèn tử ngoại treo tường e. Phòng nuôi cây - Các giàn kệ có gắn đèn huỳnh quang - Máy điều hòa nhiệt độ - Máy lắc nằm ngang - Tủ ấm f. Phòng thí nghiệm . phòng này dùng để tiến hành các phân tích sinh hóa phân tử và di truyền - Kính hiển vi 2 mắt độ phóng đại 1000 lần - Kính lúp 2 mắt độ phóng đại 75 lần - Microtome - Máy ảnh kỹ thuật số - Hệ thống đèn chiếu - Quang phổ kế . 16 Thí nghiệm Sinh học phân tử Biên soạn Lê Lý Thuỳ Trâm 2. CÁC NHÂN TỐ ĐẢM BẢO THÀNH CÔNG TRONG NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC Vật Có 3 nhân tố chính - Bảo đảm điều kiện vô trùng - Chọn đúng môi trường và chuẩn bị môi trường đúng cách - Chọn mô cấy và xử lý mô cấy thích hợp trước và sau khi cấy. . Ý nghĩa của vô trùng trong nuôi cấy mô và tế bào thực vật Môi trường để nuôi cấy mô và tế bào thực vật có chứa đường vitamin muối khoáng. rất thích hợp cho các loại nấm và vi khuẩn phát triển. Do tốc độ phân bào của nấm và vi khuẩn lớn hơn rất nhiều so với tế bào thực vật nếu trong môi trường nuôi cấy chỉ nhiễm một vài bào tử nấm hoặc vi khuẩn thì chỉ sau vài ngày đến một tuần toàn bộ bề mặt môi trường và mô nuôi cấy sẽ phủ đầy một hoặc nhiều loại nấm và vi khuẩn. Thí nghiệm phải bỏ đi vì trong điều kiện này mô nuôi cấy sẽ không phát triển và chết dần. Nguồn tạp nhiễm Có 3 nguồn tạp nhiễm chính - Dụng cụ thuỷ tinh môi trường nuôi cấy và nút đậy không được vô trùng tuyệt đối - Trên b ề mặt hoặc bên trong mô cấy tồn tại các sợi nấm bào tử nấm hoặc vi khuẩn - Trong quá trình thao tác làm rơi nấm hoặc vi khuẩn theo .
