Thuyết trình Kỹ thuật di truyền: "Thư viện bộ gen và ngân hàng cDNA" gồm 2 nội dung chính. Cụ thể trình bày về khái niệm và quá trình thành lập thư viện bộ gen và thư viện cDNA. Hy vọng đây là tài liệu tham khảo hữu ích cho bạn. | THƯ VIỆN BỘ GEN VÀ THƯ VIỆN cDNA TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MH. KỸ THUẬT DI TRUYỀN GVHD: TS. Trần Thị Dung 1 NỘI DUNG CHÍNH THƯ VIỆN cDNA THƯ VIỆN BỘ GEN THƯ VIỆN BỘ GEN KHÁI NIỆM QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP KHÁI NIỆM Chia nhỏ DNA bộ gen và chèn chúng vào tế bào chủ. Chứa tất cả DNA bộ gen của sinh vật . Thư viện gen (Ngân hàng gen) QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP TÁCH CHIẾT DNA CẮT GẮN VECTOR ĐƯA VÀO TẾ BÀO TẠO DÒNG SÀNG LỌC TÁCH CHIẾT VÀ TINH SẠCH DNA Lấy mẫu vật (nuôi cấy vi sinh vật, nghiền mẫu mô động vật, thực vật ở nhiệt độ thấp). Phá vỡ màng tế bào và màng nhân. Loại bỏ các thành phần không mong muốn trong mẫu chủ yếu là protein.(chiết xuất bằng phenol). Cô đặc DNA lại bằng ethanol hay iso-propanol lạnh. Rửa lại DNA bằng ethanol lạnh và đem bảo quản DNA trong dung dịch TE (ở nhiệt độ thấp). PHÂN CẮT DNA BỘ GEN Sử dụng enzyme cắt giới hạn RT (Reverse Transcriptase) Mỗi loại enzyme cắt tại một vị trí đặc hiệu trên DNA và vector chuyển gen. => Tạo ra | THƯ VIỆN BỘ GEN VÀ THƯ VIỆN cDNA TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MH. KỸ THUẬT DI TRUYỀN GVHD: TS. Trần Thị Dung 1 NỘI DUNG CHÍNH THƯ VIỆN cDNA THƯ VIỆN BỘ GEN THƯ VIỆN BỘ GEN KHÁI NIỆM QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP KHÁI NIỆM Chia nhỏ DNA bộ gen và chèn chúng vào tế bào chủ. Chứa tất cả DNA bộ gen của sinh vật . Thư viện gen (Ngân hàng gen) QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP TÁCH CHIẾT DNA CẮT GẮN VECTOR ĐƯA VÀO TẾ BÀO TẠO DÒNG SÀNG LỌC TÁCH CHIẾT VÀ TINH SẠCH DNA Lấy mẫu vật (nuôi cấy vi sinh vật, nghiền mẫu mô động vật, thực vật ở nhiệt độ thấp). Phá vỡ màng tế bào và màng nhân. Loại bỏ các thành phần không mong muốn trong mẫu chủ yếu là protein.(chiết xuất bằng phenol). Cô đặc DNA lại bằng ethanol hay iso-propanol lạnh. Rửa lại DNA bằng ethanol lạnh và đem bảo quản DNA trong dung dịch TE (ở nhiệt độ thấp). PHÂN CẮT DNA BỘ GEN Sử dụng enzyme cắt giới hạn RT (Reverse Transcriptase) Mỗi loại enzyme cắt tại một vị trí đặc hiệu trên DNA và vector chuyển gen. => Tạo ra 2 thư viện gen khác nhau khi cắt bằng 2 loại enzyme RT. Sử dụng enzyme Alkaline phosphatase Enzyme được dùng để : Loại nhóm 5’ phosphate của DNA hay RNA trước khi đánh dấu phóng xạ. Loại nhóm 5’ phosphate của DNA hay RNA. Không bị nối vòng khi cắt bằng RT T4 polinucleotide kinase và alkaline phosphatase thường được sử dụng đồng thời trên vector và đoạn DNA cần gắn xen trong kỉ thuật tạo dòng. TẠO DNA TÁI TỔ HỢP Sử dụng enzyme nối Ligase ENZYME LIGASE DNA ligase T4 DNA ligase T4 RNA ligase T4 POLYNUCLEOTIDE KINASE ĐƯA DNA TÁI TỔ HỢP VÀO TẾ BÀO CHỦ Mục đích: Sử dụng bộ máy của tế bào chủ để sao chép vector tái tổ hợp thành một số lượng lớn bản sao .Tuỳ thuộc loại tế bào chủ , người ta sử dụng một kĩ thuật chuyển thích hợp. Tách chiết plasmid cho thí nghiệm tạo dòng. ĐƯA DNA TÁI TỔ HỢP VÀO TẾ BÀO CHỦ Loại tế bào chủ E. coli Eukaryote 14 ĐƯA DNA TÁI TỔ HỢP VÀO TẾ BÀO CHỦ Phương pháp thực hiện: Hóa biến nạp: CaCl2 + sốc nhiệt Điện biến nạp: dòng điện cao thế cục bộ TẠO DÒNG Tế bào .
