Các bước cơ bản trong phương pháp tạo dòng, tạo dòng từ mRNA, tạo dòng từ DNA, phương pháp tạo dòng được cải tiến là những nội dung chính trong bài thuyết trình "Phương pháp tạo dòng". để có thêm tài liệu phục vụ nhu cầu học tập và nghiên cứu. | TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHƯƠNG PHÁP TẠO DÒNG GVHD: TS. Trần Hoàng Dũng . Trần Hồng Bảo Quyên Nhóm 04 - ĐHSH5LT Phạm Thị Diễm Tô Thị Mỹ Hạ Hoàng Thị Thanh Hạnh Phạm Thị Thúy Hằng Huỳnh Thị Phương Liên Thúy Kiều Nguyễn Thị PhươngThanh Trần Thị Thu Thanh Trần Nguyễn Hoàng Thơ Phạm Minh Tiệp Đặng Quang Trung Nguyễn Trương Phương Tứ NỘI DUNG Các bước cơ bản trong phương pháp tạo dòng. Tạo dòng từ mRNA. Tạo dòng từ DNA. Phương pháp tạo dòng được cải tiến. 1. Các bước cơ bản trong phương pháp tạo dòng: Xử lý nguồn vật liệu tạo dòng DNA hay mRNA. Chọn và xử lý các vector. Tạo vector tái tổ hợp. Chuyển vector tái tổ hợp vào tế bào chủ. 2. Tạo dòng từ mRNA: Ưu điểm: . mRNA là kết quả của quá trình phiên mã . mRNA chứa các trình tự mã hóa. Ứng dụng: . Tạo thư viện cDNA. . Nghiên cứu sự biểu hiện gen . Sự điều hòa biểu hiện gen Thư Viện cDNA - Chỉ là tập hợp nhỏ một phần của hệ gen, gồm các gen được biểu hiện - Các trình tự cADN phản ánh trình tự các . | TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHƯƠNG PHÁP TẠO DÒNG GVHD: TS. Trần Hoàng Dũng . Trần Hồng Bảo Quyên Nhóm 04 - ĐHSH5LT Phạm Thị Diễm Tô Thị Mỹ Hạ Hoàng Thị Thanh Hạnh Phạm Thị Thúy Hằng Huỳnh Thị Phương Liên Thúy Kiều Nguyễn Thị PhươngThanh Trần Thị Thu Thanh Trần Nguyễn Hoàng Thơ Phạm Minh Tiệp Đặng Quang Trung Nguyễn Trương Phương Tứ NỘI DUNG Các bước cơ bản trong phương pháp tạo dòng. Tạo dòng từ mRNA. Tạo dòng từ DNA. Phương pháp tạo dòng được cải tiến. 1. Các bước cơ bản trong phương pháp tạo dòng: Xử lý nguồn vật liệu tạo dòng DNA hay mRNA. Chọn và xử lý các vector. Tạo vector tái tổ hợp. Chuyển vector tái tổ hợp vào tế bào chủ. 2. Tạo dòng từ mRNA: Ưu điểm: . mRNA là kết quả của quá trình phiên mã . mRNA chứa các trình tự mã hóa. Ứng dụng: . Tạo thư viện cDNA. . Nghiên cứu sự biểu hiện gen . Sự điều hòa biểu hiện gen Thư Viện cDNA - Chỉ là tập hợp nhỏ một phần của hệ gen, gồm các gen được biểu hiện - Các trình tự cADN phản ánh trình tự các sản phẩm mARN được hoàn thiện sau quá trình phiên mã - Các protein được mã hóa bởi cADN có thể được tổng hợp trong một tế bào chủ mà ở đó không cần có phân tử mARN - cADN có trật tự và cấu trúc đơn giản hơn ADN hệ gen. . Tổng hợp cDNA: Tổng hợp cDNA có 2 cách: Cách 1: Quá trình tổng hợp có 3 giai đoạn: + Bước 1: Tổng hợp sợi thứ nhất nhờ RTase + Bước 2: Tổng hợp sợi thứ hai nhờ AND polymerase + Bước 3: Cắt vùng kẹp tóc nhờ nuclease S1. Thu ds cDNA Cách 2: + Bước 1: Tổng hợp sợi thứ nhất nhờ RT, sau đó gắn đuôi oligo-C vào đầu 3’ nhờ Terminal transferase, thu sợi thứ nhất nhờ Alkaline sucrose gradient + Bước 2: thu sợi thứ 2 nhờ RTase + Bước 3: Thu ds cDNA nhờ RE AND polymerase Cách 1: sem lại bước 3 Cách 2: xem lại bước 2 và bước 3 Hai cách tổng hợp cDNA . Tạo dòng cDNA trong vector plasmid: - Cắt plasmid ở những vị trí xác định nhờ RE - Tạo cDNA đầu so le: mối liên kết (linker, adapter), đuôi đồng trùng hợp. - Nối đoạn chèn cDNA vào plasmid sẽ được tổ hợp .
