Bài giảng Công nghệ DNA tái tổ hợp giới thiệu tới các bạn một số nội dung chính sau: Các enzyme dùng trong tạo dòng phân tử, điện di gel, khuếch đại in vitro DNA bằng phản ứng chuỗi polymerase (PCR),. để nắm bắt nội dung chi tiết cảu bài giảng. | Công nghệ DNA tái tổ hợp Nguyễn Hoàng Lộc Đại học Huế Huế 2007 Bài giảng Chương 1 Các enzyme dùng trong tạo dòng phân tử ENZYME HẠN CHẾ (RE) Các RE cắt DNA ở các vị trí nhận biết đặc hiệu của chúng gồm từ 4-6 cặp nucleotide có trình tự đối xứng đảo ngược nhau, có khả năng tạo ra các đoạn DNA có đầu tận cùng đầu bằng hay đầu so le. Ví dụ: enzyme EcoRI nhận biết chuỗi 6 nucleotide, enzyme HaeIII nhận biết chuỗi 4 nucleotide: EcoRI HaeIII đầu so le đầu bằng 1. Gắn các đầu tận cùng được enzyme hạn chế cắt DNA ligase DNA ligase 2. Isochizomer Là trường hợp những enzyme được phân lập từ nhiều nguồn khác nhau nhưng lại cắt trong một trình tự, các enzyme đó được gọi là isochizomer. II. DNA POLYMERASE (DNA-DEPENDENT-DNA POLYMERASE) DNA polymerase I của E. coli Chuỗi polypeptide có khối lượng phân tử Da. Có 3 hoạt tính: 2. Đoạn Klenow của DNA polymerase I của E. coli Khối lượng phân tử Da. Là DNA polymerase I nhưng thiếu hoạt . | Công nghệ DNA tái tổ hợp Nguyễn Hoàng Lộc Đại học Huế Huế 2007 Bài giảng Chương 1 Các enzyme dùng trong tạo dòng phân tử ENZYME HẠN CHẾ (RE) Các RE cắt DNA ở các vị trí nhận biết đặc hiệu của chúng gồm từ 4-6 cặp nucleotide có trình tự đối xứng đảo ngược nhau, có khả năng tạo ra các đoạn DNA có đầu tận cùng đầu bằng hay đầu so le. Ví dụ: enzyme EcoRI nhận biết chuỗi 6 nucleotide, enzyme HaeIII nhận biết chuỗi 4 nucleotide: EcoRI HaeIII đầu so le đầu bằng 1. Gắn các đầu tận cùng được enzyme hạn chế cắt DNA ligase DNA ligase 2. Isochizomer Là trường hợp những enzyme được phân lập từ nhiều nguồn khác nhau nhưng lại cắt trong một trình tự, các enzyme đó được gọi là isochizomer. II. DNA POLYMERASE (DNA-DEPENDENT-DNA POLYMERASE) DNA polymerase I của E. coli Chuỗi polypeptide có khối lượng phân tử Da. Có 3 hoạt tính: 2. Đoạn Klenow của DNA polymerase I của E. coli Khối lượng phân tử Da. Là DNA polymerase I nhưng thiếu hoạt tính exonuclease 5’→ 3’. 3. DNA polymerase của bacteriophage T4 (T4-infected E. coli) Khối lượng phân tử Da. Hoạt tính exonuclease của DNA polymerase phage T4 lớn hơn của DNA polymerase I của E. coli đến 200 lần. DNA polymerase phage T4 không cần có primer vẫn tổng hợp được DNA. 4. Taq DNA polymerase (Thermus aquaticus) Khối lượng phân tử Da. Taq DNA polymerase là một loại DNA polymerase chịu nhiệt lấy từ vi khuẩn Thermus aquaticus. III. ENZYME PHIÊN MÃ NGƯỢC (REVERSE TRASNCRIPTASE) Enzyme tổng hợp DNA từ khuôn mẫu RNA. Có ở trong các retrovirus. Có các hoạt tính: IV. LIGASE 1. Bacteriophage T4 DNA ligase (Bacteriophage T4-infected E. coli) Khối lượng phân tử Da. Enzyme xúc tác tạo liên kết phosphodiester giữa đầu 3’-OH đầu 5’-PO4 trong DNA sợi đôi. 2. RNA ligase T4 (Bacteriophage T4-infected E. coli) Enzyme xúc tác tạo liên kết phosphodiester giữa đầu 3’-OH đầu 5’-PO4 trong RNA hoặc DNA sợi đơn. V. CÁC LOẠI ENZYME KHÁC 1.
