Bài giảng Chương I - Các kỹ thuật chính của công nghệ sinh học hiện đại: Bài 1 sẽ giới thiệu tới các bạn về thu nhận gen; Vector tách dòng; enzyme giới hạn và một số enzyme thường dùng;. Cùng tìm hiểu để nắm bắt nội dung thông tin tài liệu. | CHƯƠNG I - CÁC KỸ THUẬT CHÍNH CỦA CÔNG NGHỆ SINH HỌC HIỆN ĐẠI BÀI 1 CÔNG NGHỆ DNA TÁI TỔ HỢP Công nghệ DNA tái tổ hợp, còn được gọi là nhân dòng gen hay nhân dòng phân tử, là một khái niệm bao quát gồm một số quy trình thí nghiệm dẫn đến việc chuyển thông tin di truyền (DNA) từ sinh vật này sang sinh vật khác. THẾ NÀO LÀ DNA TÁI TỔ HỢP I. THU NHẬN GEN Vào năm 1969, Becwitt, Shapiro đã thông báo về công trình tách gen từ operon lactose của E. coli dựa trên cơ sở kết hợp các phương pháp di truyền vi sinh cổ điển với các phương pháp vật lý để tách và lai các phân tử DNA. Có thể thu nhận gen để thực hiện kỹ thuật tái tổ hợp DNA bằng ba phương pháp khác nhau. đọan ADN chứa gen từ bộ gen: Toàn bộ DNA được tách ra những đoạn nhỏ có chiều dài – cặp base bằng phương pháp lắc cơ học hay bằng enzyme cắt hạn chế. Sau đó gắn vào các vector mang gen tạo thành plasmid tái tổ hợp. Phương pháp này thường cho các đoạn DNA có kích thước khác nhau và không xác định chính xác đoạn DNA ta mong muốn. Tuy nhiên phương pháp này vẫn đựơc dùng trong việc tạo ra thư viện gen hay ngân hàng gen. hợp bằng phương pháp hóa học Bằng hiểu biết về trình tự và sự sắp xếp các nucleotide trên gen, các acid amin trong chuỗi polypeptide mà người ta có thể tổng hợp đựơc các đoạn gen mong muốn bằng phương pháp hóa học. tổng hợp gen từ mARN tương ứng Nguyên tắc của phương pháp là dựa vào khả năng hoạt động của enzyme phiên mã ngược. Enzyme này có khả năng tổng hợp nên DNA một mạch (cDNA – complementary DNA) từ khuôn mARN hoặc cũng có thể từ một đoạn polyribonucleotide thu nhận đựơc từ quá trình tổng hợp hoá học. II. VECTOR TÁCH DÒNG Vector tách dòng (cloning vector) gồm nhiều loại như plasmid, phage, cosmid, virus, .Mỗi loại vector tách dòng có những ưu, nhược điểm nhất định. Tùy thuộc kích thước của gen tách dòng và đặc điểm của loại tế bào chủ để chọn loại vector tách dòng thích hợp. 1. Các vector đối với Các vector tách dòng đơn giản nhất, được sử dụng rộng rãi | CHƯƠNG I - CÁC KỸ THUẬT CHÍNH CỦA CÔNG NGHỆ SINH HỌC HIỆN ĐẠI BÀI 1 CÔNG NGHỆ DNA TÁI TỔ HỢP Công nghệ DNA tái tổ hợp, còn được gọi là nhân dòng gen hay nhân dòng phân tử, là một khái niệm bao quát gồm một số quy trình thí nghiệm dẫn đến việc chuyển thông tin di truyền (DNA) từ sinh vật này sang sinh vật khác. THẾ NÀO LÀ DNA TÁI TỔ HỢP I. THU NHẬN GEN Vào năm 1969, Becwitt, Shapiro đã thông báo về công trình tách gen từ operon lactose của E. coli dựa trên cơ sở kết hợp các phương pháp di truyền vi sinh cổ điển với các phương pháp vật lý để tách và lai các phân tử DNA. Có thể thu nhận gen để thực hiện kỹ thuật tái tổ hợp DNA bằng ba phương pháp khác nhau. đọan ADN chứa gen từ bộ gen: Toàn bộ DNA được tách ra những đoạn nhỏ có chiều dài – cặp base bằng phương pháp lắc cơ học hay bằng enzyme cắt hạn chế. Sau đó gắn vào các vector mang gen tạo thành plasmid tái tổ hợp. Phương pháp này thường cho các đoạn DNA có kích thước khác nhau và không xác định chính xác đoạn .
