Trong các tổ chức của cơ thể sống, protein có thể ở dưới dạng tự do trong các dịch sinh vật hoặc dưới dạng kết hợp, hoặc bị cầm trong các tế bào. Hơn nữa, trong tế bào có chứa hàng nghìn loại protein khác nhau, nếu ta cần nghiên cứu từng loại protein, trước hết phải chiết rút và tinh sạch chúng. Chính vì vậy, các kỹ thuật chiết rút, tinh sạch và nghiên cứu protein luôn ở vị trí trung tâm của các nghiên cứu hóa sinh và luôn được cập nhật và hiện đại hóa | r 6 Chương 5 Các phương pháp chiết rút tinh sạch và xác định protein I. Khái niệm Trong các tổ chức của cơ thể sống protein có thể ở dưới dạng tự do trong các dịch sinh vật hoặc dưới dạng kết hợp hoặc bị cầm trong các tế bào. Hơn nữa trong tế bào có chứa hàng nghìn loại protein khác nhau nếu ta cần nghiên cứu từng loại protein trước hết phải chiết rút và tinh sạch chúng. Chính vì vậy các kỹ thuật chiết rút tinh sạch và nghiên cứu protein luôn ở vị trí trung tâm của các nghiên cứu hóa sinh và luôn được cập nhật và hiện đại hóa. II. Các biện pháp cần thiết để nhận protein nguyên thể Các phương pháp chiết rút và tinh sạch protein đều dựa trên những tính chất hóa lý của protein như độ tích điện kích thước phân tử độ hòa tan. của protein cần chiết rút. Nhiều protein còn liên kết với các phân tử sinh học khác nên việc chiết rút các protein này còn phụ thuộc vào bản chất của các liên kết. Muốn thu nhận được các protein nguyên thể tức là protein có tất cả tính chất tự nhiên đặc trưng của nó cần sử dụng các biện pháp khác nhau. . Nhiệt độ Để tách các protein khác nhau dựa trên kết tủa của chúng người ta có thể sử dụng phương pháp biến tính chọn lọc nhờ tác dụng của nhiệt. Một điều cần lưu ý là chỉ nên dùng đối với trường hợp các protein enzyme bền với nhiệt. Dịch protein enzyme được giữ ở 50 - 700C trong thời gian xác định sau đó protein tạp đã bị biến tính được loại bỏ bằng cách lọc hoặc ly tâm. Như vậy dịch chiết protein thô bền với nhiệt có thể được thu nhận bằng cách cho kết tủa không thuận nghịch phần lớn các protein tạp. Để thu nhận chế phẩm protein theo phương pháp kết tủa thuận nghịch bằng các muối trung tính cần tiến hành ở nhiệt độ thấp đối với dung môi hữu cơ cần tiến hành ở nhiệt độ dưới 00C tránh biến tính đặc biệt là protein enzyme. . Nồng độ proton pH Protein là các chất lưỡng tính vì vậy trong các dung dịch acid và kiềm chúng sẽ bị phân ly như sau 68 Kiềm Protein - COOH Protein - COO- H acid _ acid _ Protein - NH2 Protein - NH3 Kiềm Do các acid
