Mục tiêu của luận văn nhằm chuẩn hóa được quy trình kỹ thuật thực hiện phản ứng PCR phát hiện vi khuẩn Chlamydia trachomatis; xác định được tỷ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở bệnh nhân viêm âm đạo, cổ tử cung. | Phản ứng hai vòng là một NAATs có độ nhạy và độ đặc hiệu rất cao. Tuy nhiên khả năng ngoại nhiễm cũng rất lớn. Để giảm thiểu nguy cơ ngoại nhiễm, chúng tôi sử dụng bốn phòng riêng biệt, một để pha mix, một để chuẩn bị mẫu và PCR lần 1, một tạo phản ứng PCR lần 2 và một phòng điện di. Trong các phản ứng chúng tôi sử dụng dUTP thay thế cho dCTP đồng thời sử dụng enzyme Uracyl-N-Glycosylase (UNG) nồng độ 0,05U. Enzyme này có tác dụng phân cắt các liên kết N- glycosylic giữa Uracyl và glucose của các sản phẩm ngoại nhiễm có chứa dUTP trong phản ứng thành các dUTP tự do, vô hiệu hoá amplicon nhiễm từ những đợt PCR trước đó do vậy sẽ tránh được kết quả dương tính giả. Do vậy, trước khi thực hiện các chu kỳ khuếch đại trong chu trình PCR, cần ủ bệnh phẩm ở 37ºC trong 15 phút với enzyme UNG để phá các trình tự sản phẩm PCR nhiễm từ các đợt trước. Các chu trình khuếch đại tiếp theo sẽ làm bất hoạt hoạt tính của UNG với nhiệt độ trên 55ºC. Sau khi chạy xong các chu kỳ khuếch đại, ủ mẫu ở 72ºC trong thời gian 20 phút để bất hoạt hoàn toàn hoạt tính của UNG, không gây cản trở cho việc đọc kết quả PCR.
