Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 879-2006 về quy trình kiểm nghiệm vacxin phòng bệnh của lợn áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin vô hoạt được chế tạo từ các chủng Escherichia coli. Vacxin có chất bổ trợ, dạng lỏng. . | BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN 10TCN TIÊU CHUẨN NGÀNH 10 TCN 879-2006 QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VACXIN PHÒNG BỆNH E. COLI CỦA LỢN HÀ NỘI – 2005 TIÊU CHUẨN NGÀNH 10 TCN 879-2006 QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VACXIN PHÒNG BỆNH E. COLI CỦA LỢN (Ban hành kèm theo Quyết định số /QĐ-BNN-KHCN ngày tháng 12 năm 2006 của Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn) Phạm vi áp dụng: Qui trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin vô hoạt được chế tạo từ các chủng Escherichia coli. Vacxin có chất bổ trợ, dạng lỏng. 1. Mẫu: Theo 10 TCN 160 – 92 “Vacxin thú y - Qui trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm”. 2. Kiểm tra vô trùng: Theo 10 TCN 161-92 “Vacxin thú y - Qui trình kiểm tra vô trùng”. 3. Kiểm tra an toàn: . Vacxin phải được kiểm tra an toàn trên động vật chủ: Ít nhất 2 lợn khoẻ, mẫn cảm, chưa tiêm phòng, thể trọng 25 – 30kg/con được tiêm 2 liều vacxin theo đường tiêm ghi trên nhãn. Lợn được theo dõi ít nhất 7 ngày, không được có bất cứ phản ứng bất thường nào ở vị trí tiêm hoặc triệu chứng lâm sàng của bệnh do vacxin gây ra. . Phương pháp thay thế: Dùng một trong hai phương pháp sau: . Ít nhất 5 chuột nhắt trắng thể trọng 18-20g/con, mỗi con được tiêm vào xoang bụng hoặc dưới da 0,5ml vacxin. Tất cả chuột phải hoàn toàn khoẻ mạnh sau thời gian 7 ngày theo dõi. . Ít nhất 2 chuột lang thể trọng 300-400g/con, mỗi con được tiêm 2 liều vacxin vào xoang bụng. Tất cả chuột đều phải hoàn toàn khoẻ mạnh sau thời gian 7 ngày theo dõi. 4. Kiểm tra hiệu lực: Vacxin được kiểm tra hiệu lực bằng một trong các cách sau đây: . Năm chuột lang thể trọng 300-400g/con được tiêm 1/2 liều vacxin ghi trên nhãn (1ml vacxin phải có n x 109 CFU trong đó: n: Số kháng nguyên trong vacxin) vào bắp thịt. Sau 14 ngày, gây miễn dịch lần 2 cùng liều lượng và đường tiêm. 14 ngày sau miễn dịch lần 2, lấy máu làm phản ứng ngưng kết chậm trong ống nghiệm với kháng nguyên K nhuộm màu TTC 4% (Triphenyl Tetrasolium Chloride) của các chủng có trong vacxin. Huyết thanh đối chứng được lấy trước khi miễn dịch. Huyết thanh pha loãng theo cấp số 2 hoặc pha loãng gấp 2 lần. Vacxin đạt tiêu chuẩn hiệu lực nếu: Huyết thanh của ít nhất 3/5 chuột lang miễn dịch có hiệu giá ngưng kết với kháng nguyên K của các chủng có trong vacxin tăng ít nhất 4 lần so với huyết thanh đối chứng. . Ba mươi chuột nhắt trắng, thể trọng 18-20g/con được chia làm 2 lô: - Lô 1: gồm 10 con được lấy máu ngay, chắt huyết thanh làm đối chứng. - Lô 2: gồm 20 con được miễn dịch lần 1 với liều 1/10 liều vacxin quy định vào dưới da. Sau 21 ngày lấy máu 1/2 số chuột và miễn dịch lần 2 cho 1/2 số chuột còn lại. Chuột miễn dịch lần 1 cho hiệu giá kháng thể của lô vacxin tăng gấp 4 lần so với đối chứng thì không cần phải chờ kết quả của miễn dịch lần 2. - Nếu miễn dịch lần 1 không đạt thì sau khi miễn dịch lần thứ hai 14 ngày lấy máu chuột làm phản ứng ngưng kết chậm. Vacxin đạt tiêu chuẩn hiệu lực nếu huyết thanh tập trung của 10 chuột nhắt trắng có hiệu giá ngưng kết với kháng nguyên K của các chủng có trong vacxin tăng ít nhất 4 lần so với huyết thanh đối chứng. CFU: Colony Form Unit - Đơn vị khuẩn lạc. KT. BỘ TRƯỞNG THỨ TRƯỞNG 10 TCN 879-2006
