Trong bài viết này chúng tôi trình bày kết quả biểu hiện protein GP41 của virus HIV phân type CRF01_AE ở vi khuẩn E. coli chủng BL21 (DE3) và ứng dụng GP41 tái tổ hợp để phát hiện kháng thể kháng HIV trong huyết thanh bệnh nhân bằng Western blot và ELISA. | Tạp chí Công nghệ Sinh học 9(1): 29-36, 2011 BIỂU HIỆN PROTEIN GP41 CỦA VIRUS HIV PHÂN TYPE CRF01_AE TRONG E. COLI VÀ ỨNG DỤNG ðỂ PHÁT HIỆN KHÁNG THỂ KHÁNG HIV TRONG HUYẾT THANH BỆNH NHÂN BẰNG WESTERN BLOT VÀ ELISA Bạch Thị Như Quỳnh1, Vũ Thị Hiền1, Hà Thị Thu1, Nguyễn Thị Hoa1, Lê Phương Hằng1, Nguyễn Thanh Tùng1, Nguyễn Xuân Bắc2, ðồng Văn Quyền1, Lê Văn Phủng3, ðinh Duy Kháng1 1 Viện Công nghệ sinh học Trường ðại học Dược, Hà Nội 3 Viện Kiểm ñịnh Quốc gia vắc xin và Sinh phẩm y tế 2 TÓM TẮT Trong bài báo này chúng tôi trình bày kết quả biểu hiện protein GP41 của virus HIV phân type CRF01_AE ở vi khuẩn E. coli chủng BL21 (DE3) và ứng dụng GP41 tái tổ hợp ñể phát hiện kháng thể kháng HIV trong huyết thanh bệnh nhân bằng Western blot và ELISA. Gen mã hóa vùng ngoại bào (extracellular domain) của protein GP41 ñược khuếch ñại bằng phương pháp PCR, gắn vào vector biểu hiện pET32a+. Các dòng vector tái tổ hợp mang gen gp41 ñược chọn lọc bằng cắt kiểm tra với các enzyme cắt hạn chế và xác ñịnh trình tự. Theo thiết kế, GP41 tái tổ hợp ñược gắn với 6 Histidine và Theoredoxin (Trx) ở ñầu N có khối lượng phân tử khoảng 37 kDa. GP41 tái tổ hợp biểu hiện ở dạng hòa tan với hiệu suất cao nhất (20 mg/l môi trường nuôi cấy) ở ñiều kiện 30oC và 0,5 mM IPTG. Protein tái tổ hợp ñược tinh chế bằng cột sắc ký ái lực ProBond Nickel-Clelating Resin, sau ñó protein tinh sạch ñược sử dụng ñể phát hiện kháng thể kháng HIV tự nhiên trong huyết thanh bệnh nhân bằng Western blot và ELISA. Kết quả Western blot cho thấy GP41 tái tổ hợp phản ứng ñặc hiệu với kháng thể kháng lại chúng trong huyết thanh bệnh nhân nhiễm HIV, ñặc biệt phản ứng với kháng thể kháng HIV phân type CRF01_AE mạnh hơn so với kháng thể kháng HIV phân type B. ðiều này gợi ý sự cần thiết phải phát triển các kit chẩn ñoán HIV trên cơ sở các kháng nguyên có nguồn gốc từ các phân type ñang lưu hành trong nước. Từ khóa: HIV-1 subtype CRF01_AE, gp41, kit chẩn ñoán HIV, Western blot, ELISA MỞ ðẦU Việt Nam là một trong những .
