Trong bài viết này, chúng tôi biểu hiện enterocin P của chủng E. faecium P13 trong vi khuẩn Bacillus subtilis 168, một trong những chủng biểu hiện đã được nghiên cứu kĩ, đảm bảo tính an toàn khi ứng dụng, và có khả năng tiết một lượng lớn protein ra môi trường nuôi cấy. Để tránh hiện tượng phân cắt peptide tái tổ hợp do tác động của protease của tế bào chủ, đoạn gen entP dài 132 bp được dung hợp với các phân đoạn gen baamylF1 (~0,7 kb) và baamylF2 (~1,0 kb) trước khi đưa vào vector pAC7 để tạo thành plasmid tái tổ hợp pAC-amyl1-entP và pAC-amyl2-entP. | Tạp chí Công nghệ Sinh học 8(1): 13-20, 2010 THIẾT KẾ PLASMID TÁI TỔ HỢP TỪ VECTOR BIỂU HIỆN PAC7 MANG GEN ENTP DUNG HỢP VỚI CÁC PHÂN ðOẠN BAAMYLF1 VÀ BAAMYLF2 ðỂ TỔNG HỢP ENTEROCIN P TRONG BACILLUS SUBTILIS 168 Nguyễn Thanh Nhàn1, Phạm Thị Minh ðức2, Lê Thu Ngọc3, Lê Văn Trường1, ðỗ Thị Huyền1, Trần Ngọc Tân1, Phạm Thùy Linh4, Trương Nam Hải1 1 Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam Trường ðại học Bách Khoa ðà Nẵng 3 Trường ðại học Khoa học tự nhiên, ðại học Quốc gia Hà Nội 4 Viện Hóa học 2 TÓM TẮT Với hoạt tính kháng khuẩn mạnh và phổ tác dụng rộng trên nhiều vi khuẩn gây bệnh như Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, enterocin P của chủng Enterococcus faecium P13 ñã ñược sản xuất tái tổ hợp trong các hệ biểu hiện khác nhau như Escherichia coli, Pichia pastoris, Lactococcus lactis, Methylobacterium extorquens. Trong nghiên cứu này, chúng tôi biểu hiện enterocin P của chủng E. faecium P13 trong vi khuẩn Bacillus subtilis 168, một trong những chủng biểu hiện ñã ñược nghiên cứu kĩ, ñảm bảo tính an toàn khi ứng dụng, và có khả năng tiết một lượng lớn protein ra môi trường nuôi cấy. ðể tránh hiện tượng phân cắt peptide tái tổ hợp do tác ñộng của protease của tế bào chủ, ñoạn gen entP dài 132 bp ñược dung hợp với các phân ñoạn gen baamylF1 (~0,7 kb) và baamylF2 (~1,0 kb) trước khi ñưa vào vector pAC7 ñể tạo thành plasmid tái tổ hợp pAC-amyl1-entP và pAC-amyl2-entP. Các ñoạn gen dung hợp baamylF1-entP và baamylF2-entP sau khi tích hợp vào hệ gen của B. subtilis ñược biểu hiện trong môi trường LB bổ sung 10µg/ml kanamycin. Protein tái tổ hợp BaamylF1-Enterocin P và BaamylF2-Enterocin P thu ñược từ môi trường sau 24 h nuôi cấy ñược xử lý với 50% formic acid ñể phân cắt enterocin P khỏi dạng dung hợp. Kết quả thử hoạt tính kháng khuẩn ñối với các vi sinh vật chỉ thỉ là S. aureus, B. cereus cho thấy, enterocin P sau khi ñược phân cắt từ ñoạn peptide dung hợp có khả năng ức chế sự sinh trưởng và phát triển của các vi khuẩn .
