Trong nghiên cứu này chúng tôi trình bày kết quả cảm ứng biểu hiện và tinh chế thu nhận enzyme T4 DNA ligase tái tổ hợp. Plasmid tái tổ hợp pET16b-T4Dnl mang gen gp30 mã hóa enzyme T4 DNA ligase. Thẻ 10xHis được gắn vào đầu N của protein T4 DNA ligase để hỗ trợ cho việc tinh chế thu nhận. | TAÏP CHÍ PHAÙT TRIEÅN KH&CN, TAÄP 14, SOÁ T3- 2011 BIỂU HIỆN VÀ THU NHẬN ENZYME T4 DNA LIGASE TÁI TỔ HỢP TRONG E. COLI Dương Long Duy, Lương Văn ðức, Nguyễn Thị Phương Hiếu, Trần Thanh Hòa, ðặng Thị Phương Thảo, Trần Linh Thước Trường ðại học Khoa học Tự nhiên, ðHQG-HCM (Bài nhận ngày 21 tháng 03 năm 2011, hoàn chỉnh sửa chữa ngày 18 tháng 11 năm 2011) TÓM TẮT: Trong nghiên cứu này chúng tôi trình bày kết quả cảm ứng biểu hiện và tinh chế thu nhận enzyme T4 DNA ligase tái tổ hợp. Plasmid tái tổ hợp pET16b-T4Dnl mang gen gp30 mã hóa enzyme T4 DNA ligase. Thẻ 10xHis ñược gắn vào ñầu N của protein T4 DNA ligase ñể hỗ trợ cho việc tinh chế thu nhận. Chúng tôi tiến hành biến nạp plasmid pET16b-T4Dnl vào tế bào E. coli BL21(DE3). Sau ñó tiến hành cảm ứng biểu hiện protein 10xHis-T4Dnl bằng IPTG và tinh chế thu nhận bằng phương pháp sắc ký ái lực với cột Ni-NTA. Kết quả biểu hiện và tinh chế ñược xác nhận bằng SDSPAGE và lai Western. Protein thu nhận ñược thử hoạt tính bằng phương pháp nối các ñoạn DNA λ/HindIII. Từ khóa: T4 DNA ligase, 10xHis-T4Dnl, E. coli, protein tái tổ hợp. MỞ ðẦU protein tái tổ hợp trong E. coli thì hệ thống T4 DNA ligase có nguồn gốc từ thực khuẩn vector pET dựa trên promoter T7 ñược sử dụng thể T4, ñược mã hóa bởi gen gp30 dài 1464bp rộng rãi nhất. Do promoter T7 chỉ tương thích nằm trong ñoạn DNA 1,9kb khi cắt bộ gen với T7 RNA polymerase nên những vector có phage T4 bằng enzyme HindIII. Cấu trúc promoter T7 chỉ ñược sử dụng cho hệ thống tế protein chỉ gồm một mạch polypeptide với bào chủ E. coli có mang gen mã hóa T7 RNA trọng lượng phân tử khoảng . T4 polymerase như E. coli BL21(DE3). Gen mã DNA ligase thuộc họ enzyme nucleotidyl hóa T7 RNA polymerase ñược gắn vào bộ gen transferase, có vai trò xúc tác phản ứng hình tế bào chủ dưới sự kiểm soát của lacI repressor thành liên kết phosphodiester giữa hai phân tử và promoter lacUV5. T7 RNA polymerase chỉ DNA, cần năng lượng là ATP và cofactor là ñược biểu hiện khi ñược
