Protein EBNA1 của EBV được biểu lộ ở tất cả thể tiềm ẩn và sử dụng các promoter khác nhau, bao gồm Wp, Cp và Qp. Sự điều hòa biểu lộ gen EBNA1 do nhiều cơ chế, trong đó có sự methyl hóa cytosin của CpG ở vùng promoter. Mục tiêu nghiên cứu là thiết kế các cặp mồi để xác định mức độ methyl hóa các promoter của gen EBNA1. | Nguyễn Thị Hồng Gấm Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ 115(01): 175 - 179 XÂY DỰNG QUY TRÌNH PCR ĐA MỒI XÁC ĐỊNH SỰ METHYL HÓA PROMOTER CỦA GEN EBNA1 Nguyễn Thị Hồng Gấm* Trường Đại học Y Dược - ĐH Thái Nguyên TÓM TẮT Mục đích: Protein EBNA1 của EBV đƣợc biểu lộ ở tất cả thể tiềm ẩn và sử dụng các promoter khác nhau, bao gồm Wp, Cp và Qp. Sự điều hòa biểu lộ gen EBNA1 do nhiều cơ chế, trong đó có sự methyl hóa cytosin của CpG ở vùng promoter. Mục tiêu nghiên cứu là thiết kế các cặp mồi để xác định mức độ methyl hóa các promoter của gen EBNA1. Phƣơng pháp: tiến hành xây dựng quy trình PCR đa mồi bằng sử dụng đối tƣợng là tế bào dòng Namawa, Raji . Kết quả: Hai cặp mồi xác định methyl hóa và không methyl hóa của Wp, Cp và Qp cho kết quả dƣơng tính tốt nhất ở nồng độ ADN tƣơng đƣơng 1000 tế bào Namalwa và Raji. Đối với Cp, hai cặp mồi xác định methyl hóa và không methyl hóa cho Raji đều cho kết quả âm tính. Kết luận: Điều kiện phản ứng PCR đa mồi và các cặp mồi tự thiết kế đặc hiệu với Namalwa và Raji, ngoại trừ Cp của Raji. Từ khóa: PCR đa mồi, methyl hóa, Wp, Cp và Qp ĐẶT VẤN ĐỀ* EBNA1 (EBV nuclear antigen 1) có chiều dài 641 acid amin () đƣợc biểu lộ hầu nhƣ tất cả tế bào nhiễm EBV và đóng một vai trò quan trọng trong việc duy trì episom (dạng vòng) của EBV trong nhân tế bào chủ, cũng nhƣ chức năng phiên mã của virut [1]. EBNA1 cũng có thể liên kết với các intron đầu tiên xuôi chiều của promoter Qp để tự điều hòa biểu lộ protein EBNA1. Sự biểu lộ của EBNA1 dƣới sự điều hòa của các promoter Cp, Wp hoặc Qp, tùy theo các thể nhiễm tiềm ẩn khác nhau của EBV trong tế bào chủ [2, 3]. Sự methyl hóa ADN diễn ra ở các vùng promoter này là một trong những yếu tố tác động lên điều hòa phiên mã dẫn đến ức chế hoặc tăng cƣờng biểu lộ gen [4]. Hiện tƣợng này xuất hiện do một gốc -CH3 liên kết đồng hóa trị với carbon số 5 của Cytosin nằm ở vị trí hai nucleotid Cytosin-Guanin theo chiều 5’, viết tắt là CpG (p là liên kết phosphodieste). CpG thƣờng tập trung ở các vùng promoter
