Mục tiêu của bài viết nhằm thiết lập được kỹ thuật Taqman probe real-time PCR định lượng nồng độ BKV ADN, góp phần chủ động trong việc theo dõi và giám sát BKV ở bệnh nhân sau ghép thận. | TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5-2018 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG NỒNG ĐỘ ADN BK POLYOMAVIRUS BẰNG KỸ THUẬT TAQMAN PROBE REAL-TIME PCR Hoàng Xuân Sử*; Trịnh Thị Mỹ Anh**; Nguyễn Sỹ Lánh*** Phan Quốc Toản****; Nguyễn Giang Hòa****; Đinh Thị Thu Hằng* TÓM TẮT Mục tiêu: thiết lập được kỹ thuật Taqman probe real-time PCR định lượng nồng độ BK polyomavirus ADN. Vật liệu và phương pháp: kỹ thuật Taqman probe real-time PCR định lượng nồng độ BK polyomavirus ADN trong công trình này được nghiên cứu thiết lập với cặp mồi, probe đặc hiệu thiết kế để nhân gen VP1 sử dụng phần mềm Primer3plus, Bioedit và đánh giá bước đầu trên bộ mẫu chuẩn ADN cùng mẫu huyết tương, nước tiểu của 10 bệnh nhân sau ghép thận có BK polyomavirus (+) và 10 mẫu máu ngoại vi của người hiến máu tình nguyện BK polyomavirus (-). Kết quả và kết luận: phản ứng real-time PCR tối ưu có thành phần: 1X QuantiTect Probe PCR Master Mix (Qiagen, Đức); 0,2 μ mồi xuôi, mồi ngược mỗi loại, 0,05 o μ probe, 5 μl ADN khuôn, điều chỉnh H2O khử ion đủ thể tích 20 μl, chu trình nhiệt: (50 C/2 o o o o phút) (95 C/15 phút) (94 C/15 giây, 58 C/60 giây) x 45 chu kỳ, duy trì ở 7 C. Kỹ thuật Taqman probe real-time PCR đạt ngưỡng phát hiện 1 copy/µl trên panel mẫu với độ tin cậy 95%, bước đầu đánh giá cho kết quả tương đương khi so sánh với kit RealStar® BKV PCR trên 20 mẫu bệnh phẩm lâm sàng, góp phần chủ động trong việc theo dõi và giám sát BK polyomavirus ở bệnh nhân sau ghép thận ở Việt Nam. * Từ khóa: BK polyomavirus; Bệnh thận do B Taqman probe real-time PCR. polyomavirus; Định lượng; Ghép thận; Quantification of BK Polyomavirus Load in Vietnamese Renal Transplant Recipients by an In-house Taqman Probe Real-time PCR Assay Summary Objectives: To establish an in-house real-time PCR assay using Taqman probe for detection and quantification of BKV DNA load in renal transplant recipients. Materials and methods: An inhouse quantitative real-time PCR assay was established with specific primer pairs and Taqman probe targeting .
