Tyrosinase được nghiên cứu từ nhiều năm qua và đã được ứng dụng một cách rộng rãi trong nhiều lĩnh vực như y học, công nghiệp thực phẩm, xử lí và phát hiện ô nhiễm hợp chất phenol trong môi trường. đặc biệt tạo điện cực tyrosinase để phân tích nhanh các hợp chất phenol trong nước thải và trong các nông sản thực phẩm. Ưu điểm lớn nhất của điện cực tyrosinase là thiết bị nhỏ gọn, thời gian phân tích nhanh, giá thành rẻ, kết quả chính xác. | TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Tập 48, số 2, 2010 Tr. 37-45 NGHIÊN CỨU TẠO ĐIỆN CỰC TYROSINASE TỪ ASPERGILLUS ORYZAE TP01 VÀ ỨNG DỤNG TRỊNH THỊ THU HẰNG, NGUYỄN THỊ XUÂN SÂM, ĐỖ THỊ THU HUYỀN, ĐẶNG THỊ THU 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Tyrosinase (EC ) là enzim thuộc nhóm polyphenoloxydase có chứa ion kim loại đồng (Cu2+) trong trung tâm hoạt động. Enzim này xúc tác phản ứng hydroxyl hóa các monophenol thành o-diphenol và oxi hóa o-diphenol thành dopaquinone [5]. Tyrosinase được nghiên cứu từ nhiều năm qua và đã được ứng dụng một cách rộng rãi trong nhiều lĩnh vực như y học, công nghiệp thực phẩm, xử lí và phát hiện ô nhiễm hợp chất phenol trong môi trường. đặc biệt tạo điện cực tyrosinase để phân tích nhanh các hợp chất phenol trong nước thải và trong các nông sản thực phẩm. Ưu điểm lớn nhất của điện cực tyrosinase là thiết bị nhỏ gọn, thời gian phân tích nhanh, giá thành rẻ, kết quả chính xác [1, 6, 7]. 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . Vật liệu và hoá chất - Tyrosinase từ nấm mốc Aspergillus oryzae TP01. - Hoá chất: L-DOPA, Catechol, L-Tyrosine, Phenol, L- ascobic, β-Mertacapton ethanol, EDTA, Tris-HCl, Acrylamide, Bromphenol blue, methanol . hãng Sigma (Mỹ), Merk (Đức) và một số hoá chất thông dụng khác. - Vi điện cực do Viện Quốc tế đào tạo về khoa học vật liệu (ITIMS) Đại học Bách Khoa Hà Nội cung cấp. . Phương pháp nghiên cứu - Tinh chế tyrosinase bằng phương pháp kết tủa aceton và sắc kí trao đổi ion cột MonoQ HR 5/5 trên hệ thống FPLC [3]. - Kiểm tra độ tinh sạch tyrosinase bằng phương pháp điện di trên gel polyacrylamid SDS – PAGE [3] - Tạo điện cực tyrosinase bằng điện cực điện hóa. - Ứng dụng điện cực tyrosinase phát hiện nhanh các hợp chất phenol. 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . Tách, tinh sạch tyrosinase 37 Dịch enzim sau kết tủa bằng aceton (1:1 v/v) được hòa tan trong đệm Tris-HCl 20 mM, pH 7,5 (đệm A) sau đó tiến hành chạy sắc kí qua cột trao đổi ion (Mono Q HR 5/5) trên hệ thống FPLC. Sau khi cân bằng bởi đệm A, protein enzim được đẩy
