Trong nghiên cứu này, phương pháp HPLC để định lượng omeprazol trong huyết tương người đã được xây dựng và thẩm định. Mẫu huyết tương được làm sạch bằng phương pháp gây tủa protein với dung môi là methanol, sau đó li tâm với tốc độ 12000rpm trong 10 phút. Dịch sau khi li tâm được lọc qua màng lọc 0,45um làm dịch tiêm sắc kí. | Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 3 59 Định lượng omeprazol trong huyết tương bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC-DAD) Nguyễn Lê Vân Hà, Nguyễn Thị Thủy, Dương Đình Chung* Đại học Nguyễn Tất Thành * ddchung@ Tóm tắt Trong nghiên cứu này, phương pháp HPLC để định lượng omeprazol trong huyết tương người đã được xây dựng và thẩm định. Mẫu huyết tương được làm sạch bằng phương pháp gây tủa protein với dung môi là methanol, sau đó li tâm với tốc độ 12000rpm trong 10 phút. Dịch sau khi li tâm được lọc qua màng lọc 0,45 m làm dịch tiêm sắc kí. Điều kiện sắc kí được thực hiện như sau: Cột C18 (4,6 x 150mm, 5 m), với lọc tiền cột tương ứng; Đầu dò - DAD (301nm); Pha động:acetonitril – dipotassium hydrogene phosphat 3mM (27:73); Tốc độ dòng 1,2ml/phút; phương pháp này đã được thẩm định cho khả năng lặp lại (RSD 0999 ở 250 - 8000ng/ml) và độ nhạy (LOQ 289,5ng ml). Hiệu suất chiết cao (94,2 - 98,8%) với RSD 0,05). Mặt khác, giữa 2 phương pháp chiết tách OMZ thì việc gây tủa protein dễ thực hiện, nhanh chóng. Vì vậy, qui trình xử lí mẫu bằng phương pháp gây tủa protein với dung môi là methanol tỉ lệ 1:3 được lựa chọn để tiếp tục khảo sát. Khảo sát điều kiện sắc kí Thăm dò một số pha động trên cột C18, sử dụng hỗn hợp pha động là methanol, acetonitril, nước điều chỉnh với các điều kiện tỉ lệ khác nhau. Chọn điều kiện sắc kí sao cho pic OMZ và IDM tách hoàn toàn nhau và tách khỏi các pic tạp và đạt độ tinh khiết cần thiết cho định lượng và các thông số sắc kí đạt yêu cầu. Điều kiện sắc kí phân tích OMZ trong huyết tương được lựa chọn như sau: Cột sắc kí Zobrac XDB C18 (150x4,6mm, 5µm) và tiền cột XDB (10x 4,6mm, 5µm) (Agilent, Mĩ), nhiệt độ cột 40 C, bước sóng phát hiện 301nm, thể tích tiêm mẫu là 20µl. Pha động acetonitril – nước chứa 3mM K2HPO4 (37:73) với tốc độ dòng 1,2ml/phút. Qui trình định lượng OMZ trong huyết tương Dung dịch chuẩn gốc: indomethacin 275µg/ml và 70µg/ml omeprazol trong methanol. Mẫu chuẩn: Lấy 400µl huyết tương cho vào ống li .
