Bài viết trình bày đặc điểm tối ưu hóa quy trình real-time PCR định lượng nồng độ ADN virut BK có độ nhạy cao trong huyết tương, nước tiểu ở bệnh nhân sau ghép thận. | TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2019 TỐI ƢU HÓA QUY TRÌNH REAL-TIME PCR ĐỊNH LƢỢNG NỒNG ĐỘ ADN VIRUT BK CÓ ĐỘ NHẠY CAO Ở BỆNH NHÂN GHÉP THẬN Đinh Thị Thu Hằng1; Lê Thị Bảo Quyên 1, 2 Phạm Quốc Toản3; Hoàng Xuân Sử1 TÓM TẮT Mục tiêu: tối ưu hóa quy trình real-time PCR định lượng nồng độ ADN virut BK có độ nhạy cao trong huyết tương, nước tiểu ở bệnh nhân sau ghép thận. Vật liệu và phương pháp: kỹ thuật real-time PCR được phát triển, tối ưu với độ nhạy cao trên cơ sở phân tích trình tự vùng gen đặc hiệu VP1 của các chủng virut BK từ bệnh nhân sau ghép thận ở Việt Nam và đánh giá độ chính xác, độ ổn định trên mẫu chuẩn cũng như đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu trên 30 mẫu nhóm bệnh virut BK (+) và 30 mẫu nhóm chứng người hiến máu tình nguyện virut BK (-). Kết quả và kết luận: quy trình real-time PCR tối ưu có độ chính xác cao khi đánh giá trên các mẫu 4 3 2 chuẩn nồng độ 10 , 10 , 10 (copy/µl) với hệ số biến thiên nội phản ứng lần lượt là 0,42%; 1,92% và 1,07%, hệ số biến thiên liên phản ứng lần lượt là 3,38%; 1,28% và 1,47%, độ ổn định o 4 tháng ở điều kiện -20 C. Khi đánh giá trên các mẫu nhóm bệnh và nhóm chứng, kỹ thuật đạt độ nhạy, độ đặc hiệu 100%. Đồng thời, kỹ thuật phù hợp tốt so với kít thương mại Realstar BKV PCR (Hãng Altona) với hệ số Kappa 0,73 trong xác định virut BK. Kết quả bước đầu cho thấy, kỹ thuật real-time PCR này sử dụng phù hợp hơn trong chẩn đoán virut BK trên bệnh 2 4 nhân ghép thận ở Việt Nam, đã định lượng được 8/30 mẫu virut BK (+) có nồng độ 10 - 10 copies/ml mà kít Altona bỏ sót. Như vậy, đã tối ưu thành công quy trình real-time PCR định lượng virut BK, góp phần theo dõi, giám sát virut BK ở bệnh nhân sau ghép thận, giảm thiểu tối đa nguy cơ thải ghép do virut BK có nguy cơ dẫn đến bệnh thận. * Từ khóa: Virut BK; Bệnh thận do virut BK; Ghép thận; Real-time PCR. Optimization of a Novel Real-Time PCR Quantitative Assay for BK Polyomavirus in Renal Allograft Recipients Summary Objectives: To optimize a novel high sensitive real-time .
