Sắc kí là một họ các kĩ thuật hoá học phân tích dùng để tách các chất trong một hỗn hợp. Nó bao gồm việc cho mẫu chứa chất cần phân tích trong "pha động", thường là dòng chảy của dung môi, di chuyển qua "pha tĩnh." Pha tĩnh trì hoãn sự di chuyển của các thành phần trong mẫu. Khi các thành phần này di chuyển qua hệ thống với tốc độ khác nhau, chúng sẽ được tách khỏi nhau theo thời gian, giống như các vận động viên chạy maratông | Sắc ký lỏng Phương pháp tách Các cấu tử được tách phân bố giữa pha tĩnh và pha động Mobile phase (Pha động) Stationary phase (Pha tĩnh) 1. Khái niệm về kỹ thuật sắc ký lỏng Quá trình tách dựa vào tính chất hóa học, vật lý và hóa lý của các chất. Dựa trên 2 quá trình: Hấp phụ Giải hấp phụ Xảy ra liên tục giữa 2 pha: Pha tĩnh: chất rắn hoặc lỏng Pha động: chất lỏng (1 chất hoặc hỗn hợp nhiều chất) Pha động: hòa tan và di chuyển chất phân tích Pha tĩnh: giữ chất phân tích SKL chia thành 2 nhóm SK lỏng áp suất thường (sắc ký cổ điển) SK lỏng áp suất cao (SKL hiệu năng cao: HPLC) (High Performance Liquid Chromatography) Dựa vào bản chất của quá trình sắc ký, HPLC: - SK phân bố - SK pha thường (normal phase chromatography - SK pha đảo (reversed phase chromatography) - Sk trao đổi ion (ion exchange chromatography) - SK ghép cặp ion (ion pair chromatography) Pha động: Lỏng Pha tĩnh: Lỏng Pha động: lỏng Pha tĩnh: Rắn SK lỏng – lỏng (LLC) (Liquid – liquid chromatography) SK lỏng – rắn (LSC) . | Sắc ký lỏng Phương pháp tách Các cấu tử được tách phân bố giữa pha tĩnh và pha động Mobile phase (Pha động) Stationary phase (Pha tĩnh) 1. Khái niệm về kỹ thuật sắc ký lỏng Quá trình tách dựa vào tính chất hóa học, vật lý và hóa lý của các chất. Dựa trên 2 quá trình: Hấp phụ Giải hấp phụ Xảy ra liên tục giữa 2 pha: Pha tĩnh: chất rắn hoặc lỏng Pha động: chất lỏng (1 chất hoặc hỗn hợp nhiều chất) Pha động: hòa tan và di chuyển chất phân tích Pha tĩnh: giữ chất phân tích SKL chia thành 2 nhóm SK lỏng áp suất thường (sắc ký cổ điển) SK lỏng áp suất cao (SKL hiệu năng cao: HPLC) (High Performance Liquid Chromatography) Dựa vào bản chất của quá trình sắc ký, HPLC: - SK phân bố - SK pha thường (normal phase chromatography - SK pha đảo (reversed phase chromatography) - Sk trao đổi ion (ion exchange chromatography) - SK ghép cặp ion (ion pair chromatography) Pha động: Lỏng Pha tĩnh: Lỏng Pha động: lỏng Pha tĩnh: Rắn SK lỏng – lỏng (LLC) (Liquid – liquid chromatography) SK lỏng – rắn (LSC) (Liquid – solid chromatography) - Dựa vào trạng thái pha tĩnh Khi nối với đầu do (detector), HPLC cho phép: Định tính: dựa vào thời gian lưu Định lượng: dựa vào chiều cao hoặc diện tích peak 2. Nguyên tắc cấu tạo của hệ thống máy HPLC 0: Nguồn cung cấp pha động (mobile phase) - Bình chứa pha động 1 2 3 4 5 0 1: Bơm cao áp (hệ thống cung cấp dung môi) Bơm pha động vào cột tách Điểu khiển tốc độ dòng, áp suất của pha động 2. Van bơm mẫu (Injection valve): Bơm mẫu PT vào cột tách theo những lượng mẫu nhất định Tiêm mẫu bằng tay Tiêm mẫu tự động (Auto sampler) 3: Cột tách (Column) Cột chứa pha tĩnh Yếu tố quyết định quá trình tách sắc ký Cột tách có kích cỡ khác nhau Chiều dài: 10 – 25cm Đường kính: 2 – 5mm 4: Đầu dò (detector) Thiết bị phát hiện chất phân tích (định tính và định lượng) Có nhiều loại khác nhau tùy mục đích phân tích: UV-VIS, Huyønh Quang, Ñoä Daãn, Ñieän Hoùa, Khoái Phoå, 5. Hệ thống ghi nhận và xử lý tín hiệu: Thu thập và xử lý kết quả Recorder, Computer + printer, software
