Enzym cố định là enzym đươc định vị vật lý vào một vài vùng xác định trên chất mang mà vẫn giữ được hoạt tính và có thể lặp lại nhiều lần (Kennedy và Cabral,1987) hoặc có thể nói ”enzym cố định là enzym được gắn lên các chất mang không hòa tan hoặc được gắn với nhau bằng liên kết đồng hóa trị tạo nên đại phân tử enzym không hòa tan “.