Gen APC (tumor - supresor adenomatous polyposis coli gene) là một gen ức chế khối u có 15 exon nằm tại vị trí 5q21-q22, mã hóa protein gồm 2843 acid amin. Các đột biến dòng mầm gây mất chức năng của protein APC làm β-catenin tích tụ trong tế bào và đi vào nhân, kích hoạt yếu tố phiên mã hoạt động, kích thích sự tăng sinh mất kiểm soát của tế bào dẫn đến ung thư. | Xây dựng quy trình giải trình tự cDNA gen APC Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số 5 * 2015 Nghiên cứu Y học XÂY DỰNG QUY TRÌNH GIẢI TRÌNH TỰ cDNA GEN APC Đoàn Nam Khánh*, Lê Minh Khôi**, Nguyễn Thị Băng Sương** TÓM TẮT Giới thiệu: Gen APC (tumor - supresor adenomatous polyposis coli gene) là một gen ức chế khối u có 15 exon nằm tại vị trí 5q21-q22, mã hóa protein gồm 2843 acid amin. Các đột biến dòng mầm gây mất chức năng của protein APC làm β-catenin tích tụ trong tế bào và đi vào nhân, kích hoạt yếu tố phiên mã hoạt động, kích thích sự tăng sinh mất kiểm soát của tế bào dẫn đến ung thư. Mục tiêu: Xây dựng quy trình giải trình tự cDNA gen APC. Đối tượng và phương pháp: RNA tổng số được tách chiết bằng chloroform, isopropanol có bổ sung isogen và tổng hợp thành cDNA bằng phương pháp MMLV – RT. Sử dụng 10 cặp mồi để khuếch đại 15 exon của gen APC và giải trình tự bằng máy tự động. Kết quả được phân tích bằng phần mềm chuyên dụng. Kết quả: Xây dựng thành công quy trình giải trình tự cDNA gen APC với nhiệt độ bắt cặp tối ưu là 61oC, độ nhạy của quy trình là 5 ng/ μL. Sản phẩm giải trình tự tương đồng với trình tự gen APC. Kết luận: Xây dựng thành công quy trình giải trình tự cDNA gen APC. Từ khóa: Gen APC, khuếch đại gen, quy trình giải trình tự. ABSTRACT ESTABLISH THE PROTOCOL FOR AMPLIFICATION AND SEQUENCING OF APC GENE Doan Nam Khanh, Le Minh Khoi, Nguyen Thi Bang Suong * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 19 - No 5 - 2015: 189 - 193 Introduction: APC (adenomatous polyposis coli) is a tumor suppressor gene. It contains 15 exons located at 5q21-q22. The 2843 amino-acid APC protein plays an important role in regulating the Beta-catein growth signal factor. Mutations in APC gene make Beta-catenin accumulate and translocate from the cytoplasm to the nucleus, where it might serve as a transcriptional factor to stimulate tumour formation. Aim: Establish the protocol for sequencing cDNA APC gene. .
