Tách dòng và biểu hiện yếu tố sinh trưởng nguyên bài sợi 10 của người (hFGF-10) ở E.coli

Bài viết tiến hành tách dòng, biểu hiện và tinh chế Protein tái tổ hợp hFGF-10 ở để nghiên cứu các đặc tính của hFGF-10 tái tổ hợp trên các dòng tế bào. | Tách dòng và biểu hiện yếu tố sinh trưởng nguyên bài sợi 10 của người (hFGF-10) ở 25 (2): 25-28 T¹p chÝ Sinh häc 6-2003 T¸ch dßng vµ biÓu hiÖn yÕu tè sinh tr−ëng nguyªn bµo sîi 10 cña ng−êi (hFGF-10) ë E. coli NguyÔn bÝch nhi ViÖn C«ng nghÖ sinh häc Masashi Suzuki ViÖn C«ng nghÖ sinh häc vµ Nh©n chñng häc quèc gia NhËt B¶n Nhãm gien vµ protein cña c¸c yÕu tè sinh ARN tæng sè cña nFo ng−êi (Toyobo) ®−îc tr−ëng nguyªn bµo sîi-Fibroblast Growth Factor sö dông lµm mÉu cho ph¶n øng RT-PCR. (FGF) ®ãng vai trß quan träng trong c¸c qu¸ Ph¶n øng phiªn mF ng−îc RT (reverse tr×nh sinh tr−ëng, biÖt hãa tÕ bµo, ph¸t triÓn. transcription) ®−îc tiÕn hµnh nh− sau: hçn hîp Chóng cã t¸c dông nh− nh÷ng mitogien tham ph¶n øng bao gåm ®Öm RT, måi ngÉu nhiªn, gia vµo c¸c qu¸ tr×nh t¹o m¹ch m¸u, lµm lµnh DTT (dithio threitol), dNTP, chÊt øc chÕ ARN vÕt th−¬ng, söa ch÷a c¸c m«. C¸c polypeptit aza, MMLV (Moloney Murin leukemia virus) nµy cã 30-60% thµnh phÇn axit amin, c¸c exon transcriptaza vµ ARN nFo ®−îc ñ ë 37°C trong vµ c¸c intron cã cÊu tróc t−¬ng tù nhau trong 75 phót, sau ®ã pha loFng b»ng n−íc cÊt. S¶n vïng gien mF hãa protein vµ cã ho¹t lùc víi phÈm thu ®−îc cña ph¶n øng RT (cADN) ®−îc glycosaminoglycan heparin [1,2,3]. sö dông lµm mÉu ®Ó ch¹y ph¶n øng PCR tiÕp FGF-10 lµ thµnh viªn thø 10 cña gia ®×nh theo. FGF lÇn ®Çu tiªn ®−îc t¸ch chiÕt tõ ph«i chuét cèng b»ng ph−¬ng ph¸p homology-PCR bëi Hçn hîp ph¶n øng PCR bao gåm ®Öm PCR, Yamasaki vµ cs. 1996 [4]. cADN cña FGF-10 dNTPs, s¶n phÈm RT, måi xu«i, måi ng−îc vµ chuét cèng mF hãa cho 215 axit amin (kho¶ng enzym PFU polymeraza. 24 kDa) víi ®Çu N kþ n−íc, ho¹t ®éng nh− mét Ch−¬ng tr×nh ch¹y PCR: 94°C trong 2 phót, signal peptit. mARN cña FGF-10 ®−îc biÓu 35 chu tr×nh : 94°C trong 45 gi©y, 55°C trong 45 hiÖn nhiÒu ë phæi. gi©y, 72°C trong 2 phót vµ lÇn kÐo dµi cuèi cïng hFGF-10 ng−êi cADN lÇn ®Çu tiªn ®−îc ë 72°C trong 10 phót. ph©n t¸ch tõ phæi b»ng ph−¬ng ph¸p .