Các bệnh dịch do virus luôn là mối đe dọa thường xuyên và gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi gà ở Việt Nam. Vì vậy, cần tạo ra được chế phẩm sinh học có hoạt tính tăng cường sức đề kháng các bệnh do virus ở gà. Bài báo trình bày kết quả tạo dòng, biểu hiện và xác định hoạt tính kháng virus của interferon-α và interferon-γ gà tái tổ hợp thu nhận từ hệ thống nấm men Pichia pastoris. | Tạo dòng, biểu hiện và xác định hoạt tính sinh học của Interferon gà tái tổ hợp thu nhận từ hệ thống nấm men Pichia Pastoris TẠP CHÍ SINH HỌC 2014, 36(1se): 216-225 TẠO DÒNG, BIỂU HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA INTERFERON GÀ TÁI TỔ HỢP THU NHẬN TỪ HỆ THỐNG NẤM MEN Pichia pastoris Võ Thị Minh Tâm, Nguyễn Thị Thanh Giang, Nguyễn Đăng Quân, Nguyễn Quốc Bình* Trung tâm Công nghệ sinh học tp. Hồ Chí Minh, *binhbiji@ TÓM TẮT: Các bệnh dịch do virus luôn là mối đe dọa thường xuyên và gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi gà ở Việt Nam. Vì vậy, cần tạo ra được chế phẩm sinh học có hoạt tính tăng cường sức đề kháng các bệnh do virus ở gà. Bài báo trình bày kết quả tạo dòng, biểu hiện và xác định hoạt tính kháng virus của interferon-α và interferon-γ gà tái tổ hợp thu nhận từ hệ thống nấm men Pichia pastoris. Đoạn gene mã hóa cho ChIFN-α và ChIFN-γ được tạo ra bằng phản ứng PCR và PCR/SOE (Splicing Overlapping Extension) trên khuôn mẫu là DNA bộ gen gà. Các vector biểu hiện ChINF-α và ChIFN-γ đã được dòng hóa và hai dòng P. pastoris biểu hiện ổn định ChIFN-α và ChIFN-γ đã được tạo ra. Sự biểu hiện của ChIFN-α và ChIFN-γ trong dịch nuôi cấy P. pastoris đã được xác định bằng SDS-PAGE. Hoạt tính sinh học của ChIFN-α tái tổ hợp được xác định trên mô hình nguyên bào sợi phôi gà gây nhiễm virus IBDV và NDV. Khi gây nhiễm tế bào với virus IBDV, tỷ lệ tế bào sống ở lô xử lý với ChIFN-α liều 1,6 µg/ml là 79-88% trong khi tỷ lệ tế bào sống ở lô đối chứng âm là 33-34%. Khi gây nhiễm tế bào với virus NDV, tỷ lệ tế bào sống ở lô xử lý với ChIFN-α liều 1,6 µg/ml là 81-90%, cao hơn đáng kể tỷ lệ tế bào sống ở lô đối chứng là 27-32%. Như vậy, protein tái tổ hợp ChIFN-α và ChIFN-γ đã được biểu hiện thành công trên hệ thống P. pastoris và ChIFN-α có hoạt tính kích thích tế bào kháng virus IBDV và NDV. Từ khóa: Pichia pastoris, cúm gia cầm, hoạt tính sinh học, interferon alfa, interferon gamma. MỞ ĐẦU
