Mục tiêu của bài báo là tối ưu quy trình multiplex real-time PCR nhận diện DNA bò, trâu, heo, từ đó ứng dụng quy trình để phân biệt nhanh, chính xác loại thịt và sản phẩm chế biến từ thịt bò, heo, trâu trong gian lận thượng mại. Quy trình tối ưu có nồng độ mồi 200 nM và đoạn dò 100 nM (bò và trâu), nồng độ mồi 300 nM và đoạn dò 150 nM (heo); chu trình nhiệt 500C/2 phút, 950C/2 phút, 45 chu kỳ gồm biến tính ở 950C/15 giây và bắt cặp - kéo dài ở 600C/40 giây. Quy trình có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, giới hạn phát hiện của phương pháp đối với hỗn hợp mẫu thịt tươi và thịt đã xử lý nhiệt (80 - 1200C/15 phút) là 0,1% theo khối lượng hoặc 0,005 ng DNA/phản ứng. | Phân biệt thịt bò, trâu, heo bằng kỹ thuật multiplex real-time PCR Trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh 63 A multiplex real-time PCR method for differentiation of beef, buffalo meat and pork Tan M. Tran1∗ , & Tuan N. Nguyen2 1 Regional Animal Health Office , Ho Chi Minh City, Vietnam 2 Faculty of Animal Science and Veterinary Medicine, Nong Lam University, Ho Chi Minh City, Vietnam ARTICLE INFO ABSTRACT Research Paper The objective of this study was to optimize a multiplex real-time PCR protocol for detection of DNA of beef, buffalo meat and pork, Received: May 15, 2018 serving for food authenticity. The optimized concentrations were 200 Revised: July 28, 2018 nM primer and 100 nM specific probe for beef/buffalo meat, and Accepted: August 14, 2018 300 nM primer and 150 nM probe for pork. The amplification was performed using initial denaturation at 500 C for 2 min, 950 C for 2 Keywords min, followed by 45 cycles of denaturation at 950 C for 15 sec, and annealing and extension at 600 C for 40 sec. This protocol had high Beef sensitivity and specificity. The detection limit of this method was found to be in raw and heat-treated meat mix (80 - 1210 C/15 Buffalo min) or ng DNA/reaction. The protocol of testing was applied DNA for the commercial products both fresh and processed meats. The Multiplex real-time PCR results demonstrated that 50% of raw beef sample (6/12) weren’t Pork found beef DNA. Eight of twelve beef sausage samples () contained buffalo DNA. Beef DNA were found in all 12 samples ∗ Corresponding author of beef meatballs, but eight out of the 12 meatball samples were confirmed to have buffalo DNA () and two out of the 12 Tran Minh Tan meatball samples () also contained porcine DNA. Email: tranminhtan06@ Cited as: Tran, T. M., & Nguyen, T. N. (2019). A multiplex real-time PCR method for dif- ferentiation of beef, buffalo meat and pork. The .
