Tài liệu trình bày những vấn đề kỹ thuật cơ bản cần biết của real-time PCR; máy real-time PCR; thiết bị real-time dùng đèn, hóa chất và thuốc thử cho real-time PCR, real-time PCR sử dụng probe làm chất phát huỳnh quang . | Real-time PCR các vấn đề cơ bản Real-time PCR Các vấn đề cơ bản Real-time PCR là gì Trong kỹ thuật PCR sau khi hoàn tất khuếch đại đoạn DNA đích người làm thí nghiệm phải tiếp tục làm một số bước thí nghiệm để đọc kết quả xác định có sản phẩm khuếch đại mong muốn trong ống phản ứng hay không và giai đoạn này gọi là giai đoạn thí nghiệm sau PCR. Trong giai đoạn này người làm thí nghiệm có thể thực hiện điện di sản phẩm PCR trên gel agarose để xem có vạch sản phẩm khuếch đại đúng kích thước mong muốn hay không cũng có thể thực hiện thí nghiệm lai với các đoạn dò đặc hiệu trên màng trên giếng hay phiến nhựa. để xem sản phẩm khuếch đại có trình tự mong muốn hay không. Kỹ thuật PCR mà cần phải có giai đoạn thí nghiệm để đọc và phân tích sau khi hoàn tất phản ứng khuếch đại ngày hôm nay được gọi là PCR cổ điển classical PCR . Real-time PCR là kỹ thuật PCR mà kết quả khuếch đại DNA đích hiển thị được ngay sau mỗi chu kỳ nhiệt của phản ứng chính vì vậy nên được gọi là real-time và do đặc điểm này nên với real-time PCR người làm thí nghiệm không cần thiết phải làm tiếp các thí nghiệm để đọc và phân tích kết quả để xác định có sản phẩm khuếch đại đích hay không vì kết quả cuối cùng của phản ứng khuếch đại cũng được hiển thị ngay sau khi hoàn tất phản ứng khuếch đại. Như vậy nên có thể nói real-time PCR là kỹ thuật nhân bản DNA đích trong ống nghiệm thành hàng tỷ bản sao dựa vào các chu kỳ nhiệt và kết quả khuếch đại trong ống phản ứng được hiển thị cùng lúc với phản ứng khuếch đại xảy ra để người làm thí nghiệm có thể thấy được. Các vấn đề kỹ thuật cơ bản cần biết của real-time PCR 1. Biểu đồ khuếch đại của real-time PCR Trong real-time PCR hiển thị cơ bản để người làm thí nghiệm có thể quan sát được trong quá trình nhân bản DNA của các ống phản ứng là một biểu đồ khuếch đại amplification graph . Biểu đồ này có trục tung Y là cường độ huỳnh quang phát ra từ các ống phản ứng khi nhận ánh sáng kích thích còn trục hoành X là các chu kỳ nhiệt. Trên biểu đồ khuếch đại này biểu
