Bài viết trình bày phương pháp LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) khuếch đại DNA với độ đặc hiệu và độ nhạy cao được ứng dụng để phát hiện nhanh vi khuẩn E. coli gây bệnh tiêu chảy ở người. | Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật LAMP phát hiện nhanh vi khuẩn E. coli gây bệnh tiêu chảy ở người Khoa học Y - Dược Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật LAMP phát hiện nhanh vi khuẩn E. coli gây bệnh tiêu chảy ở người Trần Thị Thanh Huyền1 Đinh Đức Thọ2 Phạm Thanh Hiền1 Trần Văn Tuấn1 1 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội 2 Trường Cao đẳng Y Thái Nguyên Ngày nhận bài 8 11 2019 ngày chuyển phản biện 15 11 2019 ngày nhận phản biện 12 12 2019 ngày chấp nhận đăng 25 12 2019 Tóm tắt Hiện nay có rất nhiều phương pháp khác nhau để phát hiện vi sinh vật gây bệnh bao gồm cả những phương pháp truyền thống và phương pháp phân tử hiện đại. Tuy nhiên trong chẩn đoán tiêu chảy do vi khuẩn Esherichia coli các phương pháp phân lập trên môi trường chọn lọc thử các tính chất sinh hóa giúp phát hiện vi khuẩn E. coli nhưng không thể phân biệt giữa các vi khuẩn E. coli hội sinh cư trú bình thường ở đường ruột với các vi khuẩn E. coli mang gen độc lực gây bệnh. Bài báo này đề cập đến phương pháp LAMP Loop-mediated isothermal amplification khuếch đại DNA với độ đặc hiệu và độ nhạy cao được ứng dụng để phát hiện nhanh vi khuẩn E. coli ở giới hạn phát hiện là 15 pg cao gấp hơn 100 lần so với phương pháp PCR. Một bộ 4 cặp mồi đặc hiệu được thiết kế để khuếch đại đoạn gen eae là một trong những gen độc lực của vi khuẩn E. coli có kích thước 288 bp trong DNA genome vi khuẩn và với sự có mặt chất chỉ thị kim loại calcein C30H26N2O13 . Phản ứng diễn ra ở điều kiện đẳng nhiệt 60oC trong khoảng 30 đến 60 phút sản phẩm phản ứng là các băng DNA phân bố giống như dạng bậc thang với kích thước thấp nhất là băng cơ sở 288 bp khi điện di trên gel agarose. Kết quả phản ứng có thể được quan sát bằng mắt thường do sự thay đổi màu của dung dịch phản ứng từ màu cam âm tính sang màu xanh huỳnh quang dương tính . Do đó đây là một kỹ thuật nhạy và đặc hiệu có khả năng phát hiện nhanh chính xác vi khuẩn E. coli gây bệnh có mang gen độc tố eae. Phương pháp phát hiện này mở ra tiềm năng ứng dụng trong
