Bài viết trình bày việc xây dựng phương pháp PCR kỹ thuật số kết hợp với tạo vi giọt (digital droplet PCR, ddPCR) nhằm phân tích các đột biến liên quan đến điều trị đích UT phổi trên gen EGFR từ các mẫu sinh thiết lỏng (ctDNA). Phương pháp ddPCR được xây dựng có ngưỡng phát hiện đột biến ở tần suất (nghĩa là 5-10 phân tử DNA ung thư trong phân tử DNA bình thường). | GIẢI PHẪU BỆNH ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP PCR KỸ THUẬT SỐ KẾT HỢP TẠO VI GIỌT DROPLET DIGITAL PCR TRONG PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN GEN PHỤC VỤ ĐIỀU TRỊ ĐÍCH UNG THƯ TRẦN LÊ SƠN1 2 PHẠM THỊ HỒNG ANH1 TRẦN THANH TRƯỜNG1 TRẦN VŨ UYÊN1 ĐẶNG MAI ANH TUẤN3 ĐINH NGUYỄN THIÊN KIM4 PHAN VĂN HIẾU3 GIANG HOA1 2 NGUYỄN HOÀI NGHĨA5 TÓM TẮT Thuốc điều trị ung thư UT thuộc nhóm ức chế hoạt tính của enzyme tyrosine kinase tyrosine kinase inhibitor TKI được cục quản lý thực phẩm và dược phẩm Mỹ FDA phê duyệt cho điều trị UT phổi không tế bào nhỏ. Nghiên cứu lâm sàng cho thấy các bệnh nhân UT mang những kiểu đột biến đặc trưng cho đáp ứng khác nhau với các thế hệ thuốc TKI khác nhau và sau một thời gian điều trị biểu hiện các đột biến kháng thuốc mới. Do đó việc xác định các kiểu đột biến đặc trưng này rất quan trọng cho dự đoán và đề ra liệu pháp điều trị trúng đích hiệu quả đồng thời theo dõi đáp ứng của bệnh nhân trong quá trình điều trị lâm sàng. Sinh thiết mô u hiện vẫn là phương pháp chuẩn vàng cho xác định các đột biến gen. Tuy nhiên trở ngại lớn nhất của phương pháp xâm lấn này là khó tiến hành lấy mẫu nhiều lần và trong nhiều trường hợp không thể thu nhận đủ mô u cho phân tích di truyền. Gần đây phương pháp sinh thiết lỏng dựa trên việc phát hiện các DNA ngoại bào được phóng thích từ tế bào ung thư circulating tumor DNA ctDNA cho phép phân tích di truyền của khối u. Tuy nhiên do tỉ lệ DNA phóng thích bởi các tế bào UT so với DNA của các loại tế bào khác thường rất thấp nên cần một phương pháp có độ nhạy cao để có thể phát hiện các đột biến với tần suất thấp. Trong nghiên cứu này chúng tôi xây dựng phương pháp PCR kỹ thuật số kết hợp với tạo vi giọt digital droplet PCR ddPCR nhằm phân tích các đột biến liên quan đến điều trị đích UT phổi trên gen EGFR từ các mẫu sinh thiết lỏng ctDNA . Phương pháp ddPCR được xây dựng có ngưỡng phát hiện đột biến ở tần suất nghĩa là 5-10 phân tử DNA ung thư trong phân tử DNA bình thường . Qui trình ddPCR này được sử dụng để phát hiện đột
