Nhằm nâng cao hiệu suất thu nhận cũng như hoạt tính của enzyme BuChE tái tổ hợp, nghiên cứu này tiến hành tối ưu hóa các điều kiện tinh sạch, gồm có tối ưu hóa dịch tế bào chứa enzyme thô, lựa chọn màng lọc, lựa chọn các loại gel tinh sạch. | Hóa học Sinh học Môi trường NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN CÔNG NGHỆ TINH SẠCH ENZYME BUTYRYLCHOLINESTERASE EC TÁI TỔ HỢP Nghiêm Ngọc Hoa1 Nguyễn Hà Trung1 Nguyễn Duy Hưng2 Nguyễn Vũ Minh Hạnh3 Phạm Kiên Cường1 Tóm tắt Butyrylcholinesterase BuChE là một esterase serine. Tác dụng chính của BuChE là xúc tác quá trình thủy phân các este cholin tạo thành cholin và axit cacboxylic. Enzyme này bị ức chế mạnh bởi các hợp chất cơ phospho và các tác nhân thần kinh. Trong nghiên cứu trước đó chúng tôi đã biểu hiện thành công protein BuChE tái tổ hợp trong vi khuẩn E. coli BL21 DE3 trong điều kiện cảm ứng với IPTG 0 25 mM sau thời gian 3 giờ ở 37oC. BuChE tái tổ hợp có kích thước khoảng 70 kDa có hoạt độ là 3 58 U mg protein. Nhằm nâng cao hiệu suất thu nhận cũng như hoạt tính của enzyme BuChE tái tổ hợp chúng tôi tiến hành tối ưu hóa các điều kiện tinh sạch gồm có tối ưu hóa dịch tế bào chứa enzyme thô lựa chọn màng lọc lựa chọn các loại gel tinh sạch. Dịch enyzme thô được chiết trong đệm phosphate 20 mM pH 8 được lọc qua màng lọc có kích thước 100 kDa. Dịch trên màng được tinh sạch bằng các phương pháp sắc ký khác nhau sắc ký lọc gel sắc ký trao đổi ion sắc ký ái lực. Kết quả kiểm tra độ tinh sạch của protein BuChE cho thấy việc s dụng cột trao đổi ion để tinh sạch protein BuChE cho hiệu suất cao nhất. Các phân đoạn có hoạt tính được cô qua màng 100 kDa enyzme sau tinh sạch có hoạt tính riêng 120 U mg pr. Từ khóa Enzyme Butyrylcholinesterase Tinh sạch. 1. MỞ ĐẦU Nhằm thu nhận được một lượng lớn enzyme butyrylcholinesterase dùng cho mục đích phân tích hoặc trị liệu cũng như nghiên cứu rất nhiều thông tin về cấu trúc và chức năng của enzyme các nhà khoa học đã tập trung nghiên cứu biểu hiện enzyme này dưới dạng tái tổ hợp 4 6 7 . Năm 2012 Brazzolotto và cộng sự đã tiến hành biểu hiện gen mã hóa cho butyrylcholinesterase của người trong Drosophila melanogaster. Protein tạo ra có khả năng glycosyl hóa cao với năng suất cao hơn 4 lần so với biểu hiện trong tế bào CHO tế bào .
