Nghiên cứu này được thực hiện nhằm đánh giá ảnh hưởng của các liều khác nhau của protein sốc nhiệt ly trích từ vi khuẩn (DnaK) lên đáp ứng miễn dịch của tôm sú. Khả năng đáp ứng miễn dịch của tôm được kiểm tra bằng phản ứng Phenoloxidase thực hiện trên cuvet, so màu bằng quang phổ kế ở bước sóng 492nm và phản ứng định lượng Real-time PCR. | VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2 ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC LIỀU HEAT SHOCK PROTEIN LÊN CÁC THÔNG SỐ MIỄN DỊCH CỦA TÔM SÚ Lê Hồng Phước1 Nguyễn Hồng Lộc1 Nguyễn Thị Hiền1 Võ Hồng Phượng1 TÓM TẮT Nghiên cứu này được thực hiện nhằm đánh giá ảnh hưởng của các liều khác nhau của protein sốc nhiệt ly trích từ vi khuẩn DnaK lên đáp ứng miễn dịch của tôm sú. Khả năng đáp ứng miễn dịch của tôm được kiểm tra bằng phản ứng Phenoloxidase thực hiện trên cuvet so màu bằng quang phổ kế ở bước sóng 492nm và phản ứng định lượng Real-time PCR. DnaK được ly trích từ chủng vi khuẩn E. coli có khả năng biểu hiện DnaK gắn với hexahistidine sau đó được tinh sạch bằng bộ kít dưới tác dụng của các hạt từ Dynabead. Lượng DnaK ly trích được kiểm tra bằng phương pháp Bradford. DnaK sau đó được trộn với dung dịch đệm nạp mẫu và điện di trên bản gel 10 SDS-PAGE. Gel sau khi điện di được nhuộm với Bio-safe Coomassie stain phản ứng SDS-PAGE hoặc chuyển qua màng lai cho phản ứng với kháng thể đặc hiệu cho DnaK phản ứng Western Blot . Tôm sú có trọng lượng trung bình 10-12g được tiêm với các liều khác nhau của DnaK 2 4 6 8 10 hoặc 15µg tôm máu tôm được thu ở các thời điểm 2 4 7 và 10 giờ sau khi tiêm DnaK. Biểu hiện của gen prophenoloxidase được kiểm tra bằng phản ứng định lượng real-time PCR. Tôm được tiêm với 8 hoặc 10 µg DnaK làm tăng biểu hiện của Prophenoloxidase proPO tại thời điểm 2 và 4 giờ sau khi tiêm và khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức khác p lt 0 05 . Kết quả này cho phép kết luận DnaK có khả năng điều khiển đáp ứng miễn dịch trên tôm sú. Từ khóa DnaK tôm sú HSP70 prophenoloxidase. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Nghiên cứu gần đây cho thấy nhiệt độ gây Heat shock protein Protein sốc nhiệt hay sốc không gây chết kích thích sinh ra lượng HSP Hsp là loại protein được sinh trong quá trình làm tăng khả năng đáp ứng với hiện tượng nhiễm sốc do nhiệt hoặc do các yếu tố khác như thay khuẩn của động vật không xương sống Singh và đổi đột ngột các yếu tố môi trường sống pH Aballay 2006 . Theo .
