Nghiên cứu này có mục tiêu là tạo tái tổ hợp ADN của gen VP28 ở virus trong tế bào nấm men nhằm thu được chủng nấm men có khả năng biểu hiện protein VP28 ngoại bào làm nguyên liệu cho việc điều chế vắc xin/tolerine phòng bệnh đốm trắng cho tôm nuôi. | VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2 DÒNG HÓA VÀ BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA PROTEIN VỎ VP28 CỦA VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG TRONG TẾ BÀO NẤM MEN PICHCHIA PASTORIS Ngô Thị Ngọc Thủy1 Nguyễn Viết Dũng2 Đặng Thị Trà My1 TÓM TẮT Virus gây bệnh đốm trắng là loại virus phổ biến và là một trong những nguyên nhân gây thiệt hại lớn cho nghề nuôi tôm he trên thế giới cũng như ở Việt Nam. Nghiên cứu này có mục tiêu là tạo tái tổ hợp ADN của gen VP28 ở virus trong tế bào nấm men nhằm thu được chủng nấm men có khả năng biểu hiện protein VP28 ngoại bào làm nguyên liệu cho việc điều chế vắc xin tolerine phòng bệnh đốm trắng cho tôm nuôi. Đoạn gen VP28 đã được khuếch đại bằng kỹ thuật Polymerase chain reaction sản phẩm khuếch đại sau đó được dòng hóa vào vector pPIC9K để tạo tái tổ hợp pPIC9K-VP28 rồi pPIC9K-VP28 được biến nạp vào tế bào nấm men Pichia pastoris GS115 để biểu hiện protein mục tiêu và cảm ứng biểu hiện bằng methanol. Quá trình sàng lọc 200 chủng nấm men sau biến nạp đã được thực hiện. Kết quả thu được 5 chủng nấm men có mang pPICK9K- VP28 có khả năng cảm ứng biểu hiện protein VP28 ngoại bào. Áp dụng phương pháp Bradford để đo nồng độ protein ngoại bào của 5 chủng nghiên cứu theo thời gian lên men P. pastoris và lượng protein tổng số cao nhất sau 72 giờ nuôi cấy là 106 9 μg ml. Từ khóa Pichia pastoris protein VP28 WSSV I. MỞ ĐẦU bằng chất kích thích miễn dịch và đặc biệt bằng Virus gây hội chứng đốm trắng White spot protein DNA tái tổ hợp vắc xin tolerine . đã syndrome virus - WSSV xuất hiện đầu tiên thu hút sự quan tâm của nhiều nhà nghiên cứu năm 1992 tại Trung Quốc Chou và ctv 1995 nhất là sau khi hiện tượng đáp ứng miễn dịch là loại virus gây bệnh nghiêm trọng và phổ biến quasi-immune response trên tôm Venegas và nhất cho các loài tôm he. Ở Việt Nam virus ctv 2000 được công bố. này được phát hiện năm 1993 và từ đó đến nay Việc sử dụng kỹ thuật tạo protein DNA tái chúng luôn là một trong những nguyên nhân tổ hợp đã được nghiên cứu ở Việt Nam với mục chủ yếu gây thiệt hại
