"Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng" thông tin đến các bạn những kiến thức về nuôi cấy sơ cấp; nuôi cấy thứ cấp; cấy chuyền; cấy chuyền tế bào bám dính; tạo dòng, thu nhận dòng . | Đại học Quốc gia TP HCM Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên Viện Tế bào gốc KỸ THUẬT CẤY CHUYỀN VÀ TẠO DÒNG CẤY CHUYỀN Passage Subculture CẤY CHUYỀN When the cell density cells cm2 substrate reaches a level such that all Khi nào thì cần cấy chuyền of the available substrate is occupied or when the cell concentration cells mL medium exceeds the capacity of the medium growth ceases or is greatly reduced. CẤY CHUYỀN Khi nào thì cần cấy chuyền Cell Confluency source https transfectopedia methods NUÔI CẤY SƠ CẤP NUÔI CẤY THỨ CẤP Nuôi cấy thứ cấp là nuôi cấy tế bào được tính từ sau lần cấy chuyền đầu tiên SVF stromal vascular fraction trước khi được đưa vào nuôi cấy là một phức hợp gồm tế bào máu ngoại vi MSC tế bào tiền thân nội mô tế bào cơ trơn tế bào quanh mạch pericyte nguyên bào sợi dưỡng bào tế bào tiền thân tạo mỡ 38 115 . Sau vài thế hệ cấy chuyền SVF trong điều kiện tiêu chuẩn quần thể tế bào trở nên khá tương đồng của tế bào trung mô ASC 38 . Gentile P. et al. 2012 Siennicka K. et al. 2016 CẤY CHUYỀN Các bước cơ bản của cấy chuyền HÚT BỎ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY CŨ RỬA BỀ MẶT GIÁ THỂ NUÔI CÓ TẾ BÀO BÁM DÍNH TÁCH CÁC TẾ BÀO BÁM KHỎI BỀ MẶT DỤNG CỤ NUÔI PHA LOÃNG CÁC TẾ BÀO BẰNG MÔI TRƯỜNG MỚI Subculture of Monolayer. Stages in the subculture and growth cycle of monolayer cells after trypsinization Cấy chuyền tế bào bám dính Loại bỏ môi trường khỏi bình nuôi Rửa bề mặt bình nuôi với PBS- free Ca2 Mg2 Bổ sung dung dịch trypsin EDTA 0 5- 3ml bình Ủ trong tủ ấm 370C Khi tế bào co tròn nổi lên tiến hành bổ sung một lượng môi trường có chứa huyết thanh Rửa loại bỏ trypsin bằng cách ly tâm 1000- 3000 vòng phút Tái huyền phù và pha loãng theo tỉ lệ thích hợp Expansion of Mesenchymal Stem Cells cells once they have reached approximately 80 confluence and are actively proliferating. IMPORTANT Subculture cells before reaching 100 confluency. remove the medium from the 10-cm tissue culture plate containing the confluent layer of human .
