Tối ưu hóa quá trình thu nhận tế bào đơn nhân máu ngoại vi (peripheral blood mononuclear cell - PBMC) và quá trình chuyển nạp tạo tế bào CAR-T. Đối tượng và phương pháp: Máu ngoại vi từ người hiến tặng khỏe mạnh được tiến hành tách PBMC bằng FicollPaque. | T p chÝ y - d îc häc qu n sù sè 4-2021 NGHIÊN CỨU TỐI ƯU HÓA QUÁ TRÌNH TÁCH TẾ BÀO ĐƠN NHÂN MÁU NGOẠI VI VÀ CHUYỂN NẠP TẠO KHỐI TẾ BÀO CAR-T CHO ĐIỀU TRỊ LƠ-XÊ-MI CẤP DÒNG LYMPHO Hồ Viết Hoành1 Đặng Thành Chung2 Nguyễn Thị Phương Thảo3 Cấn Văn Mão2 TÓM TẮT Mục tiêu Tối ưu hóa quá trình thu nhận tế bào đơn nhân máu ngoại vi peripheral blood mononuclear cell - PBMC và quá trình chuyển nạp tạo tế bào CAR-T. Đối tượng và phương pháp Máu ngoại vi từ người hiến tặng khỏe mạnh được tiến hành tách PBMC bằng Ficoll- Paque. Phản ứng chuyển nạp tạo khối tế bào CAR-T được thực hiện ngay sau khi thu nhận PBMC hoặc sau khi kích hoạt tế bào bằng bi từ gắn kháng thể kháng CD3 và CD28. Các thông số Hệ thống chuyển nạp số lượng tế bào cho một phản ứng và lượng plasmid DNA được tối ưu hóa. Kết quả Máu pha loãng 2 lần với PBS 1X cho hiệu suất thu nhận PBMC và tỷ lệ tế bào sống cao nhất. Thực hiện phản ứng chuyển nạp trên hệ thống Nucleofector 2b Lonza với 7 2 10 PBMC không kích hoạt lượng plasmid DNA 1 µg SB100X và 10 µg pSB-CAR19 cho kết quả tốt nhất. Kết luận Tối ưu hóa được quá trình tách PBMC và chuyển nạp tạo khối tế bào CAR-T cho điều trị lơ-xê-mi cấp dòng lympho. Từ khóa CAR-T CD19 Tế bào đơn nhân máu ngoại vi Chuyển nạp Hệ thống Sleeping Beauty. Optimization of Peripheral Blood Mononuclear Cells Isolation and Nucleofection for Development of Anti-CD19 CAR-T Cells in Treatment of B Lymphoblastic Leukemia Summary Objectives To optimize isolation and nucleofection based on Sleeping Beauty system of peripheral blood mononuclear cells PBMC . Materials and methods PBMCs were isolated from peripheral blood of healthy donors using Ficoll-Paque. Different dilutions of whole blood and PBS 1X were tested. Nucleofection was performed on either unstimulated PBMC or stimulated PBMC using CD3 CD28 dynalbeads . Parameters including nucleofector number of cells 1 Trung tâm Ung bướu Bệnh viện Quân y 103 Học viện Quân y 2 Bộ môn Sinh lý bệnh Học viện quân y 3 Viện Công nghệ Sinh học và Công .
