Tổng hợp nhân tạo gen mã hóa Cas9 bằng công nghệ Golden gate và biểu hiện protein tái tổ hợp trong tế bào vi khuẩn E. coli. Đối tượng và phương pháp: Nghiên cứu thực nghiệm, gen mã hóa protein Cas9 được tổng hợp bằng phương pháp Golden gate, biến nạp vào vector pET52b và biểu hiện ở tế bào E. coli. Tinh sạch protein bằng sắc ký ái lực Ni-NTA. | T p chÝ y - d îc häc qu n sù sè 5-2021 TỔNG HỢP VÀ BIỂU HIỆN PROTEIN CAS9 TÁI TỔ HỢP TRONG TẾ BÀO VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI Hoàng Xuân Cường1 Đỗ Như Bình2 TÓM TẮT Mục tiêu Tổng hợp nhân tạo gen mã hóa Cas9 bằng công nghệ Golden gate và biểu hiện protein tái tổ hợp trong tế bào vi khuẩn E. coli. Đối tượng và phương pháp Nghiên cứu thực nghiệm gen mã hóa protein Cas9 được tổng hợp bằng phương pháp Golden gate biến nạp vào vector pET52b và biểu hiện ở tế bào E. coli. Tinh sạch protein bằng sắc ký ái lực Ni-NTA. Kết quả Tạo thành công dòng tế bào E. coli BL21 DE3 mang vector pET52b-Cas9 có khả năng biểu hiện protein Cas9 tái tổ hợp ở pha tan. Thu nhận được protein Cas9 tái tổ hợp với nồng độ 4 1 mg ml và độ tinh sạch kiểm tra bằng SDS-PAGE đạt 98 . Kết luận Đã tạo được nguồn cung cấp protein Cas9 tái tổ hợp phục vụ cho các nghiên cứu trong lĩnh vực chỉnh sửa gen. Từ khóa Protein Cas9 tái tổ hợp Chỉnh sửa gen Biểu hiện. Synthesis and Expression of Recombinant Cas9 Protein in Escherichia Coli Summary Objectives To artificially synthesize Cas9-encoding gene by Golden gate technology and to express a recombinant protein in E. coli bacteria cells. Subjects and methods An experimental study the gene encoding Cas9 protein was synthesized by Golden gate method transformed into pET52b vector and expressed in E. coli cells. Purify proteins by Ni-NTA affinity chromatography. Results Successfully constructed E. coli BL21 DE3 cell line carrying pET52b-Cas9 vector with a capable of expressing recombinant Cas9 protein insoluble phase. Recombinant Cas9 protein was obtained at a concentration of mg mL and the purity was above 98 that verified by SDS-PAGE. Conclusion Self-production and provided an abundant source of recombinant Cas9 protein for research in the field of gene editing. Keywords Recombinant Cas9 protein Gene editing Expression. 1 Học viện Quân y 2 Ban Khoa học Quân sự Bệnh viện Quân y 103 Học viện Quân y Người phản hồi Hoàng Xuân Cường hoangxuancuong@ Ngày
