Bài nghiên cứu này thiết kế và tạo mẫu chuẩn có bản chất là một vùng trình tự RNA của virút viêm gan C (HCV) được đóng gói trong protein vỏ của thực khuẩn thể MS2 bằng công nghệ thiết kế armored RNA. Để hiểu rõ hơn mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của bài viết này. | DOI 7 .31-36 Khoa học Y - Dược Nghiên cứu chế tạo mẫu chuẩn RNA bền với nucleases dùng trong định lượng virút viêm gan C Nguyễn Minh Tuấn1 2 Nguyễn Thị Lệ Thủy1 Thượng Thị Thu Thủy1 Nguyễn Ngọc Lệ3 Nguyễn Mạnh Kiên3 Lê Quang Trí3 Nguyễn Bảo Toàn4 Tatyana Ilinhichna5 Phạm Thị Kim Trâm1 Nguyễn Hoàng Chương6 Nguyễn Đăng Quân1 Trung tâm Công nghệ Sinh học TP Hồ Chí Minh 1 2 Trường Đại học Bách khoa TP Hồ Chí Minh 3 Bệnh viện Quân y 7A 4 Trung tâm Y khoa MEDIC TP Hồ Chí Minh 5 Đại học Sechenov Liên bang Nga 6 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Ngày nhận bài 31 3 2021 ngày chuyển phản biện 8 4 2021 ngày nhận phản biện 18 5 2021 ngày chấp nhận đăng 25 5 2021 Tóm tắt Chứng dương hay mẫu chuẩn là thành phần không thể thiếu trong các xét nghiệm sinh học phân tử ứng dụng trong định lượng axit nucleic mục tiêu. Mẫu chuẩn thường được sử dụng phổ biến nhất là plasmid DNA cDNA hay RNA trần với đặc tính kém bền và dễ bị phân hủy bởi các enzyme phân cắt axit nucleic tồn tại trong môi trường vì vậy có thể ảnh hưởng tới độ chính xác của kết quả định lượng. Trong nghiên cứu này nhóm tác giả thiết kế và tạo mẫu chuẩn có bản chất là một vùng trình tự RNA của virút viêm gan C HCV được đóng gói trong protein vỏ của thực khuẩn thể MS2 bằng công nghệ thiết kế armored RNA. Vùng trình tự không mã hóa 5 UTR của HCV được khuếch đại và tạo dòng vào plasmid BH20. Armored RNA HCV AR-HCV được cảm ứng biểu hiện trong tế bào E. coli BL21 DE3 bằng bổ sung chất cảm ứng IPTG. AR-HCV được thu nhận bằng siêu ly tâm tỷ trọng sucrose tinh sạch bằng cột sắc ký lọc gel Superdex 75 và được xác định nồng độ đánh giá sự hình thành cấu trúc đóng gói virút bằng quan sát dưới kính hiển vi điện tử truyền qua TEM . Kết quả đánh giá độ bền khi xử lý với đồng thời 2 enzyme DNase và RNase cho thấy AR-HCV có khả năng kháng các nucleases. Ngoài ra AR-HCV duy trì được tính ổn định ở các điều kiện và thời gian bảo quản khác nhau. Khắc phục được hạn chế của các loại chất chuẩn
