Bài giảng Sinh học phân tử: Chương 7 Kỹ thuật tạo dòng, cung cấp cho người học những kiến thức như: Các công cụ sử dụng trong kỹ thuật tạo dòng; Vai trò sinh học của RE; Tạo dòng phân tử (molecular cloning); Sự khác nhau của các vector tạo dòng; Plasmid là các vector tạo dòng; .Mời các bạn cùng tham khảo! | Chương 7 Kỹ thuật tạo dòng 5 18 2020 1 Nguyễn Hữu Trí nhtri@ Kỹ thuật di truyền Là những quá trình liên quan đến việc thao tác trên phân tử DNA DNA từ một loài có thể được chuyển vào tron một loài khác Gọi là tái tổ hợp DNA Sinh vật được biến đổi gen gọi là Sinh vật bị biến đổi di truyền GMO-Genetically Modified organisms Sinh vật chuyển gen Transgenic 5 18 2020 2 Nguyễn Hữu Trí nhtri@ 1 Các công cụ sử dụng trong kỹ thuật tạo dòng Enzymes - cắt nối nucleic acid Vector- tạo dòng phân tử PCR Polymerase chain reaction Giải trình tự DNA DNA sequencing Điện di Electrophoretic separation Phát hiện gene DNA-Southern blotting lai tại chỗ in situ hybridization kỹ thuật FISH RNA- Northern blotting Pr-Western blotting lai miễn dịch IHC immunohistochemistry Tinh sạch Sinh vật chuyển gene 5 18 2020 3 Nguyễn Hữu Trí nhtri@ Restriction Enzyme RE Được tìm thấy trong các loài vi khuẩn khác nhau là các endonuclease có khả năng thủy giải DNA mạch đôi ở những vị trí xác định. Vi khuẩn sử dụng restriction enzyme để bảo vệ chúng khỏi các DNA ngoại lai. Vi khuẩn có một cơ chế để bảo vệ DNA của chúng khỏi hoạt động của các restriction enzyme của bản thân. Các RE hợp thành hệ thống bảo vệ ở prokaryote chưa có hệ thống tương tự nào được phát hiện ở eukaryote. Chúng được phân lập và sử dụng cho các phòng thí nghiệm 5 18 2020 4 Nguyễn Hữu Trí nhtri@ 2 Vai trò sinh học của RE Hệ thống biến đổi giới hạn-restriction enzyme được hoạt động cùng với hệ thống methylase. Methylases là enzyme thêm nhóm methyl vào nucleotide chuyên biệt vào A hay C trong trình tự nhận biết recognition sequence . Sự methyl hóa ngăn chặn sự nhận biết của restriction enzyme. Do đó restriction enzyme trong một tế bào không phân cắt DNA của chính nó. Tuy nhiên restriction enzyme có thể phân cắt DNA ngoại lai xâm nhập vào trong tế bào như của bacteriophage. 5 18 2020 5 Nguyễn Hữu Trí nhtri@ Restriction Endonuclease Loại I- có nhiều tiểu đơn vị có hoạt tính .
