Bài giảng Sinh học phân tử: Chương 10 Các phương pháp phân tích DNA, cung cấp cho người học những kiến thức như: Chiết tách DNA; Các phương pháp định tính và định lượng sơ bộ acid nucleic; Kỹ thuật cắt, nối, lai DNA và ứng dụng; Các phương pháp xác định trình tự DNA; Kỹ thuật PCR. Mời các bạn cùng tham khảo! | Chương 10 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DNA http Các phương pháp phân tích DNA Chiết tách DNA Các phương pháp định tính và định lượng sơ bộ acid nucleic Kỹ thuật cắt nối lai DNA và ứng dụng Các phương pháp xác định trình tự DNA Kỹ thuật PCR http Chiết tách vật liệu di truyền Nguyên tắc chung 3 bước Phá vỡ tế bào vật lý hóa học Chiết tách acid nucleic Phenol-Chloroform Kết tủa acid nucleic cồn tuyệt đối Các trường hợp cụ thể Plasmid mục tiêu loại NST bằng sự khác nhau về cấu dạng - kích thước ADN thực khuẩn tủa phage bằng PEG loại bỏ capsid Tế bào Thực vật phá tế bào bằng cách nghiền Tế bào Động vật phá tế bào bằng enzym - chất tẩy ARN bất hoạt RNase tủa bằng LiCl 8M loại ADN bằng DNase Tủa lượng ADN nhỏ độn bằng tARN Tủa bằng isopropanol tert-butanol Các kỹ thuật khác Loại carbohydrat lipid bằng CTAB Thu hồi ADN bằng sắc ký hấp phụ http Tinh chế acid Siêu ly tâm ly tâm phân đoạn nucleic Gradient liên tục không liên tục của cesium chloride CsCl Gradient saccharose Sắc ký Sắc ký ái lực sử dụng pha tĩnh là U-Sepharose hay oligodT- cellulose để tinh chế mARN. Sắc ký lọc gel để tách các nucleotid tự do sau khi tạo mẫu dò đánh dấu. Sắc ký trao đổi ion trên vi cột áp dụng để thu hồi những lượng ADN rất nhỏ. Sắc ký lỏng hiệu năng cao dùng để tinh chế các oligonucletid tổng hợp độ phân giải là 1 nucleotid plasmid phân tách các đoạn ADN. Điện di Agarose PAGE PolyAcrylamide Gel Electrophoresis http Định tính - định lượng acid nucleic Quang phổ kế OD260nm 50 μg ml dung dịch ADN hoặc ARN sợi đôi 40 μg ml dung dịch ARN hoặc ADN sợi đơn 30 μg ml oligonucleotid tới 70 base Kiểm tra độ tinh khiết bằng tỷ lệ OD260 230 hoặc OD260 280 OD320nm Điện di gel phân tách acid nucleic bằng dòng điện trong gel Định tính theo kích thước Định lượng bằng so sánh với chuẩn http Điện di http Các enzym biến đổi .
