Bài giảng Công nghệ Gene: Chương 5 PCR và các ứng dụng trong kỹ thuật di truyền, cung cấp cho người học những kiến thức như: Nhắc lại nguyên tắc của kỹ thuật PCR truyền thống; Các biến thể của kỹ thuật PCR và ứng dụng. Mời các bạn cùng tham khảo! | 11 4 2021 CHƯƠNG 5 PCR và CÁC ỨNG DỤNG TRONG KỸ THUẬT DI TRUYỀN TS. Nguyễn Ngọc Phương Thảo Email 65 11 4 2021 QUESTION 1. PCR viết tắt của từ gì 2. PCR đã được sử dụng trong các kỹ thuật di truyền nào đã được học ở các chương trước 11 4 2021 Nguyễn Ngọc Phương Thảo 131 131 MỤC TIÊU SV có khả năng trình bày nguyên tắc của kỹ thuật PCR và các biến thể khác SV có thể giải thích cách thực hiện và phân tích các ứng dụng thực tế 11 4 2021 Nguyễn Ngọc Phương Thảo 132 132 66 11 4 2021 NỘI DUNG 1. Nhắc lại nguyên tắc của kỹ thuật PCR truyền thống 2. Các biến thể của kỹ thuật PCR và ứng dụng nested PCR multiplex PCR allele-specific PCR real-time quantitative PCR reverse transcriptase PCR 3. Thảo luận Quy trình thiết kế bộ kit PCR chẩn đoán bệnh nhiễm 11 4 2021 Nguyễn Ngọc Phương Thảo 133 133 1. PCR truyền thống 2. Các loại PCR và ứng dụng 3. Thảo luận PCR TRUYỀN THỐNG PCR Tổng lượng DNA khuếch đại m x 2n m Là số bản sao của chuỗi mã hóa. n Là số chu kỳ. 11 4 2021 Nguyễn Ngọc Phương Thảo 134 134 67 11 4 2021 1. PCR truyền thống 2. Các loại PCR và ứng dụng 3. Thảo luận CÁC THÀNH PHẦN CỦA PHẢN ỨNG PCR Máy luân nhiệt DNA template Primers forward reverse dNTPs Buffer Enzyme DNA polymerase 11 4 2021 Nguyễn Ngọc Phương Thảo 135 135 1. PCR truyền thống 2. Các loại PCR và ứng dụng 3. Thảo luận CÁC THÀNH PHẦN QUAN TRỌNG PCR DNA khuôn template Hàm lượng vừa đủ plasmid 5-50ng genomic DNA 50ul phản ứng Tinh sạch không chứa các chất ức chế phản ứng SDS ethanol protein RNA. OD 260 280 nm Có thể tối ưu https pcr-6-thanh-phan-quan-trong-can-hieu- 11 4 2021 Nguyễn Ngọc Phương Thảo 136 136 68 11 4 2021 1. PCR truyền thống 2. Các loại PCR và ứng dụng 3. Thảo luận CÁC THÀNH PHẦN QUAN TRỌNG PCR Mồi primers Nên Tránh 15-30 nucleotides Cấu trúc bậc 2 Nhiệt độ nóng chảy Tm Các trình tự lặp ngươc chiều melting temperature 55-70 Nhiều hơn 3G hoặc C ở đầu 3 oC hai mồi không chênh nhau quá 5 oC 40-60 GC phân bố đồng đều Một C hoặc G ở
