Bài giảng Công cụ di truyền mới trong chọn tạo giống cây trồng: Chương - TS. Vũ Thị Thúy Hằng cung cấp đến học viên các kiến thức về một số kỹ thuật sử dụng trong chọn giống cây trồng; chiết tách, đánh giá độ sạch DNA; phương pháp PCR; điện di; giải trình tự DNA, . Mời các bạn cùng tham khảo chi tiết nội dung bài giảng! | CHƯƠNG 3 Một số kỹ thuật sử dụng trong chọn giống cây trồng Chiết tách đánh giá độ sạch DNA Phương pháp PCR Điện di . Giải trình tự DNA . Chiết tách và đánh giá độ sạnh DNA Để thu nhận DNA tinh sạch cần loại bỏ thành phần tạp nhiễm quan trọng nhất là protein Tách chiết DNA dựa trên nguyên tắc hòa tan khác nhau của các phân tử khác nhau nulceic acid protein Thu được DNA ở trạng thái nguyên vẹn tối đa không bị phân hủy bởi các tác nhân cơ học hay hóa học DNA tách chiết được dùng trong phân tích di truyền trong - Khoa học DNA sử dụng trong rất nhiều ứng dụng vd đưa DNA vào tế bào cho mục đích chẩn đoán - Y học là ứng dụng phổ biến vd đánh giá độc tính của sinh sinh vật xác định nguồn gây bệnh - Nghiên cứu tội phạm cần phục hồi DNA Các bước Có rất nhiều phương pháp tách chiết khác nhau tất cả các phương pháp gồm B1 Phá màng tế bào màng nhân B2 Loại protein và các tạp chất khác B3 Thu hồi nucleic acid Sự lựa chọn các phương pháp dựa trên nhiều yếu tố A. Hàm lượng và khối lượng của DNA B. Yêu cầu về độ tinh sạch của DNA cho ứng dụng C. Thời gian và chi phí Nguyên tắc Tách DNA khỏi các thành phần tế bào khác như proteins lipids RNA . Trách làm đứt gãy đoạn dài DNA từ tác động cơ học hoặc các enzyme Bất hoạt các enzyme trong TB DNase enzymes và ngăn chặn tác động làm ngắn đứt gãy lên DNA là bước quan trọng trong tinh sạch DNA. DNases có thể được bất hoạt bằng sử dụng nhiệt hoặc các chất hóa trị chelating agents. Tách chiết DNA Các bước Phá màng tế bào màng nhân Loại bỏ các tạp chất gồm Proteins RNA Các phân tử đa lượng khác Kết tủa và thu hồi DNA B1. Phá vỡ màng tế bào màng nhân Nghiền tế bào mô trong một hỗn hơp chất tẩy SDS và proteinase để phá vỡ màng tế bào màng nhân giải phóng DNA ra môi trường đồng thời phân hủy các protein liên kết với DNA - Chất tẩy là chất lưỡng cực sẽ kết hợp với portein màng và các phân từ phospholipid làm vỡ cấu trúc màng - Chất tẩy ion hóa có tác dụng phá màng mạnh chất tẩy không ion hóa có tác dụng phá màng nhẹ hơn B2. Loại
