Bài giảng Sinh học phân tử: Phương pháp phân tích ADN - ThS. Nguyễn Thanh Tố Nhi cung cấp cho học viên những kiến thức về chiết tách ADN; các phương pháp phân tích định tính và định lượng acid nucleic; kỹ thuật cắt, nối, lai ADN và ứng dụng; các phương pháp xác định trình tự ADN; kỹ thuật PCR; . Mời các bạn cùng tham khảo chi tiết nội dung bài giảng! | Phương pháp phân tích ADN 1 CHIẾT TÁCH ADN CÁC PP PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH amp ĐỊNH LƯỢNG ACID NUCLEIC CÁC KỸ THUẬT CẮT NỐI LAI ADN VÀ ỨNG DỤNG KỸ CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ ADN CÁC KỸ THUẬT PCR Phương pháp chiết tách ADN Phương pháp chiết tách ADN Nguyên tắc chung 3 bướ ước Phá vỡ tế bào vật lý hóa học họ Chiết tách acid nucleic Phenol-Chloroform Phenol loại Protein trong pha tủa thu ADN trong pha tan Kết tủa acid nucleic cồn tuyệt tuy ñối hoặc isopropanol Phương pháp chiết tách ADN Các trường hợp cụ thể Plasmid loại NST bằng sự khác khá nhau về cấu dạng - kích thước ADN thực khuẩn tủa phage bằng PEG loại bỏ capsid Tế bào Thực vật phá tế bào o bằng cách nghiền Tế bào ðộng vật phá tế bào o bằng enzym - chất tẩy Tinh chế acid nucleic Ly tâm phân ñoạn acid nucleic ñược siêu ly tâm trong thang t trọng saccarose hay CsCl2 lượng lượng acid nucleic cần tinh chế lớn Sắc ký Lọc gel tách acid nucleic theo kích thước phân tử ở qui mô lớn Trao ñổi ion trên vi cột thu hồi những lượng ADN rất nhỏ HPLC ñối với các oligonucleotide ñộ phân giải cao 1 nucleotid Hấp phụ ái lực mARN ñược hấp phụ bằng resin có gắn oligo dT hay dU. ðiện di gel polyacrylamid ðịnh tính - ñịnh lượng ng acid nucleic ðịnh lượng Quang phổ ph kế Nguyên tắc sự hấp thụ̣ mạnh của base ở λ 260 nm 1 ñơn vị OD260nm tương ñương nồng ñộ 50 µg ml dung dịch ADN hoặc ARN sợi ñôi 40 µg ml dung dịch ARN hoặc ADN sợi ñơn 20 µg ml oligonucleotid tới tới 70 base ðộ tinh khiết OD260 230 hoặc ho OD260 280 và OD320nm ADN tinh khiết OD260 280 280 2 . ðịnh tính - ñịnh lượng acid nucleic Điện di gel phân tách acid nucleic bằng dòng điện tron gel Định tính theo kích thước khi so với chuẩn Định lượng bằng so sánh vớ ới chuẩn Nguyên tắc ADN tích điện âm di chuyển về cực dương Hệ gel agarose hay acrylamide Tốc độ điện di ADN qua gel tùy thuộc vào Kích thước ADN Cấu dạng ADN siêu xoắn vòng vòng thẳng Nồng độ gel Điện thế ðịnh tính - ñịnh lượng acid nucleic Điện di trong trường xung đổi hướng điện trường ph .
