Bài viết Thiết kế hệ thống CRISPR/Cas9 bất hoạt OsNRAMP5 liên quan tới tích lũy cadmium ở lúa TBR225 đánh giá biểu hiện của gen đích và thiết kế hệ thống CRISPR/Cas9 (Clustered Regular Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-Associated Cas9) gây đột biến bất hoạt OsNRAMP5 của giống lúa chủ lực TBR225. | Vietnam J. Agri. Sci. 2022 Vol. 20 No. 9 1220-1229 Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 2022 20 9 1220-1229 Ngô Thị Vân Anh1 Nguyễn Anh Minh2 Phạm Thu Hằng2 Phạm Phương Ngọc2 Lê Quỳnh Mai3 Phạm Xuân Hội2 Nguyễn Duy Phương2 1 Học viện Nông nghiệp Việt Nam 2 Viện Di truyền Nông nghiệp 3 Đại học Khoa học tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội Tác giả liên hệ Ngày nhận bài Ngày chấp nhận đăng TÓM TẮT Cadmium Cd có độc tính rất cao đối với hầu hết các sinh vật sống bao gồm cả con người. Lúa gạo chứa hàm lượng Cd vượt ngưỡng 0 2 mg kg - QCVN 8- 2 2011 BYT là một trong những nguyên nhân chính gây ngộ độc Cd. OsNRAMP5 thuộc họ NRAMP natural resistance-associated macrophage protein đã được xác định có liên quan tới quá trình vận chuyển nhiều kim loại như sắt Fe kẽm Zn đồng Cu mangan Mn và Cd ở lúa. Để phục vụ nghiên cứu chức năng OsNRAMP5 chúng tôi đã đánh giá biểu hiện của gen đích và thiết kế hệ thống CRISPR Cas9 Clustered Regular Interspaced Short Palindromic Repeats CRISPR-Associated Cas9 gây đột biến bất hoạt OsNRAMP5 của giống lúa chủ lực TBR225. Bằng phương pháp xử lý nhân tạo trong dung dịch trồng thủy sinh có bổ sung Cd OsNRAMP5 đã được chứng minh tăng cường biểu hiện ở mô rễ lúa TBR225. Một phần trình tự chứa ExonI của OsNRAMP5 dài 0 29kb đã được phân lập để phục vụ thiết kế sgRNA single guide RNA cho hệ thống CRISPR Cas9 bất hoạt OsNRAMP5. Cấu trúc biểu hiện sgRNA mang hai trình tự crRNA CRISPR RNA nhận biết ExonI OsNRAMP5 đã được ghép nối vào vector nhị thể pCas9. Vector tái tổ hợp đã được kiểm tra bằng PCR và giải trình tự Nu. Kết quả nghiên cứu là tiền đề cho cải tiến chất lượng giống lúa chủ lực TBR225 bằng công nghệ chỉnh sửa hệ gen. Từ khóa Bất hoạt gen Cadmium CRISPR Cas9 OsNRAMP5 TBR225. Designing CRISPR CAS9 System for Knocking out OsNRAMP5 Related to Cadmium Accumulation in Rice Variety TBR225 ABSTRACT Cadmium Cd is highly toxic to most living organisms including humans. Rice with excessive Cd gt
