Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 7', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | - dam DNA adenine methylase Enzyme methylase này gắn các nhóm methyl ở vị trí N6 của adenine trong chuỗi 5 .GmeATC. .3 . Nhưng DNA của eukaryote không bị methyl hóa ở vị trí N6 của adenine. - dcm DNA cystosine methylase Enzyme methylase này gắn các nhóm methyl ở vị trí C5 của cytosine bên trong các chuỗi 5 . hoặc 5 . . Enzyme chủ yếu ảnh hưởng đến sự methyl hóa dcm là EcoRII enzyme As7 NI có thể nhận biết chính xác cùng một trình tự như EcoRII mặc dù nó cắt DNA ở vị trí xác định khác trong chuỗi này . Nếu không thể thay As7 NI cho EcoRII thì DNA phải được chuẩn bị từ các chủng E. coli dcm. 5. Cắt DNA bằng enzyme hạn chế . Các loại đệm dùng trong phản ứng cắt DNA Mỗi enzyme hạn chế có một điều kiện phản ứng tối ưu nhiệt độ ủ và thành phần của dung dịch đệm là những yếu tố quan trọng. Nhiệt độ yêu cầu khá chính xác còn sự khác nhau giữa các dung dịch đệm thường là không đáng kể. Để thuận tiện trong nghiên cứu người ta chia các enzyme ra làm ba nhóm - Nhóm đệm cao H . Hoạt động tốt nhất ở các dung dịch đệm có hoạt độ ion cao. - Nhóm đệm trung bình M . Thích hợp với các dung dịch đệm có hoạt độ ion trung bình. - Nhóm đệm thấp L . Thích hợp với các dung dịch đệm có hoạt độ ion thấp . Như vậy theo cách phân chia này chỉ có ba loại đệm stock là cần chuẩn bị cho phản ứng cắt DNA bằng RE Bảng . Thường các đệm stock trong bảng được pha ở nồng độ 10 và có thể giữ ở nhiệt độ 4oC 1-2 tuần hoặc -20oC không hạn định. Bảng . Các loại dung dịch đệm cho phản ứng cắt DNA bằng RE Đệm NaCl mM 7 5 mM MgCẸ mM Dithiothreitol mM Thẩp 0 10 10 1 Tnmgbình 50 10 10 1 Cao 100 50 10 1 Chú ý Riêng enzyme Smal không thể sử dụng các loại đệm ở trên mà cần phải pha dung dịch đệm đặc biệt bao gồm 20 mM KCl 10 mM pH 8 10 mM MgCl2 và 1 mM dithiothreitol. . Phương pháp cắt DNA bằng enzyme hạn chế Các phản ứng đặc trưng dùng khoảng 0 2-1 ũg DNA 20 ŨL dung dịch phản ứng hoặc ít hơn. Ví dụ a. Pha dung dịch DNA bằng nước cất hai lần vô trùng trong .
