Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 16', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | . Chuẩn bị dung dịch master mix và cho vào eppendorf tube E-tube loại 0 5 mL trộn đều các thành phần sau Đệm 10x PCR 4 5 ŨL Hỗn hợp 4 dNTP 2 5 mM mỗi 4 ŨL loại Primer-F 10 pmol DL 2 5 ŨL Primer-R 10 pmol DL 2 5 ŨL Thêm H2O tới 40 ŨL . Chuẩn bị dung dịch pha loãng của Taq pol Đệm X10 2 ŨL Taq pol 5 units DL 1 ŨL Thêm H2O tới 20 ŨL Tạo vòng băng DMA ligase Hình . Sơ đồ kỹ thuật PCR đảo ngược . Bổ sung 5 ŨL DNA khuôn mẫu 100 ng vào 40 ŨL dung dịch của master mix tube. . Bổ sung 2 ũL 1 tube dung dịch pha loãng của Taq pol. . Đặt E-tube đựng dung dịch phản ứng vào heating block của máy PCR để thực hiện chế độ nhiệt theo chu kỳ như sau - Start program - 95oC 5 phút - Thực hiện 30 chu kỳ 95oC 30 giây 50oC 30 giây và 72oC 1 phút - 72oC 10 phút - Giữ sản phẩm PCR ở 4oC - Chạy điện di để kiểm tra kết qủa PCR Hình - Nếu chưa chạy điện di thì bảo quản sản phẩm PCR ở -20oC Chú ý - Các thành phần và điều kiện của phản ứng như Độ dài của primer chế độ nhiệt trong một chu kỳ số chu kỳ đối với mỗi đối tượng có thể thay đổi ít nhiều bằng thực nghiệm. Các thông số trên chỉ có ý nghĩa tham khảo. - Nếu làm nhiều mẫu có thể trộn chung các thành phần khác trừ DNA và Taq pol sau đó chia ra từng tube rồi cho DNA và Taq pol vào sau cùng. - Thao tác trong tủ cấy vô trùng hoặc không . Hình . Điện di các sản phẩm PCR. SM Chuẩn kích thước DNA. Các đường số 1 2 3 4 và 5 Các sản phẩm PCR khác nhau. III. Tối ưu hóa các điều kiện cho PCR 1. Trình tự của primer Đối với genome của eukaryote người ta thường dùng các primer dài khoảng 18 nucleotide trở lên. Tuy nhiên cũng tùy từng trường hợp có những primer của các chỉ thị phân tử ngẫu nhiên như RAPD1 rất ngắn 10-16 mer hoặc STS2 cần primer dài hơn 20-24 mer . Nói chung genomic DNA không hoàn toàn là một trình tự ngẫu nhiên mà nó còn mang đặc tính của các họ gen những nhân tố có tính lặp lại sự lặp đoạn đơn giản hay phức tạp . Tùy theo loài sinh vật và tùy theo cách thể hiện của trình tự DNA khuôn mẫu người ta sẽ thiết kế trình
