Tham khảo tài liệu 'hộp điện trong công nghệ dna part 23', kỹ thuật - công nghệ, điện - điện tử phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả | thực hiện cho các thể tái tổ hợp có kích thước khoảng 40-50 kb. Các cosmid vector được thiết kế tối ưu nhất có chiều dài từ 4-6 kb và vì thế chúng có thể thích hợp với DNA ngoại lai có kích thước khoảng 45 kb. Mặc dù có những thuận lợi về kích thước các cosmid dùng làm vector cũng có một số khó khăn sau - Gắn vector với vector sự tái tổ hợp trong phân tử intramolecular giữa hai hoặc nhiều vector trong một cosmid đơn có thể dẫn đến cắt bỏ DNA của cosmid vector và cuối cùng mất cosmid do phân ly. - Sự chất đống lộn xộn scrambling xuất hiện do sự xâm nhiễm vào trong cùng một vector của hai hoặc nhiều đoạn không ở cạnh với đoạn DNA mong muốn trong bộ gen gốc original genome . - Khó khăn trong việc sàng lọc một số lượng lớn khuẩn lạc vi khuẩn. Sự tiện lợi của phương pháp tạo dòng các đoạn DNA lớn trong cosmid đã được Royal và cs. 1979 công bố đầu tiên. Ông có thể phân lập từ thư viện cosmid của DNA gà hai đoạn chồng lên nhau overlapping mang gen ovalbumin và hai gen giống ovalbumin. Gần đây hơn các thư viện gen dùng cosmid vector mang DNA ruồi giấm DNA chuột DNA người cũng đã được xây dựng. Hình cho thấy cosmid có chứa vị trí ori của E. coli cho phép cosmid được duy trì như một plasmid trong E. coll . Hai đầu cos gần vị trí cắt hạn chế Scal và BamHI. DNA nguồn được cắt bởi BamHI để phân đoạn có kích thước khoảng 40 kb. Gen kháng Tet Tet r định vị gần cos. Phân tử dạng plasmid được cắt bởi BamHI và ScaI. Ba mẫu DNA này được trộn vào nhau và được gắn bằng T4 DNA ligase. Sau khi gắn xong những phân tử này được đóng gói trong phần đầu của phage l và những phần tử có thể lây nhiễm sẽ được hình thành sau khi tạo đuôi. Hình . Tạo dòng trong cosmid IV. Bacteriophage M13 vector 1. Đặc điểm của bacteriophage M13 M13 là phage dạng sợi filamentous bacteriophage với DNA vòng đóng dài khoảng nucleotide Hình . M13 được xem như là một vật truyền tạo dòng cloning vehicle các vector M13 và các DNA primer đặc biệt đã được xây dựng cho phép tạo dòng đoạn DNA lớn hơn 350
