• Là kỹ thuật thao tác và tổ hợp ADN từ hai nguồn khác nhau (thường là của hai loài khác nhau) • Kỹ thuật tái tổ hợp ADN còn được gọi là kỹ thuật tạo dòng gen, gồm các bước: | Kỹ thuật di truyền 11 Kỹ thuật di truyền Bùi Tấn Anh - Khoa Khoa Học Tự Nhiên Kỹ thuật tái tổ hợp ADN -Cắt và nối ADN -Chèn ADN tái tổ hợp vào tế bào -Phân lập và tạo dòng gen Phản ứng PCR Ứng dụng của kỹ thuật di truyền Kỹ thuật tái tổ hợp ADN Là kỹ thuật thao tác và tổ hợp ADN từ hai nguồn khác nhau thường là của hai loài khác nhau Kỹ thuật tái tổ hợp ADN còn được gọi là kỹ thuật tạo dòng gen gồm các bước Gen được tạo dòng Các bản sao của gen Nghiên cứu cơ bản trên gen 3 TB chủ phát triển trong MT nuôi cây tạo thành một dòng TB có chứa gen mong muôn Protein của gen tạo dòng được biểu hiện 4 Các nghiên cứu cơ bản và các ứng dụng khác Thu hoạch Protein Nghiên cứu cơ bản trên protein Ứng dụng trong Ứng dụng trong xử lý Ứng dụng trong Y học Nông nghiệp ô nhiễm môi trường 1 Các enzyme giới hạn Vi khuẩn tự bảo vệ chống lại sự xâm nhiễm của các virus bằng cách tạo ra các enzyme giới hạn RE restriction enzymes -RE cắt liên kết phosphodiester làm cho phân tử ADN của virus bị đứt thành nhiều đoạn nhỏ - ADN của ký chủ không bị cắt bởi RE nhờ các vị trí cắt đã được methyl hóa enzyme methylase gắn nhóm -CH3 vào base A hoặc C tại vị trí cắt Thí dụ EcoRI cắt liên kết giữa G và A tại trình tự t 5 . GAATTC . 3 3 . CTTAAG . 5 Sau khi methyl hóa RE không nhận biết trình tự cắt CH3 5 . GAATTC . 3 3 . CTTAAG . 5 I Ch3 Tên gọi của enzyme giới hạn Tên của RE được gọi dựa theo tên của loài vi khuẩn mà enzyme được ly trích. - Chữ thứ nhất viết hoa là chữ đầu tiên trong tên của chi. - Chữ thứ hai và ba không viết hoa là hai chữ cái đầu trong tên của loài - Chữ thứ tư nếu có được viết hoa tên chủng Trong trường hợp ở cùng một loài vi khuẩn người ta tìm được nhiều RE thì sẽ gán thêm số La mã để chỉ thứ tự của RE được phát hiện Thí dụ - enzyme EcoRI là RE đầu tiên được phát hiện ở Escherichia coli chủng RY 13 - enzyme TaqI là RE thứ nhất được tìm thấy ở vi khuẩn Thermus aquaticus 2 Cơ chế hoạt động của enzyme giới hạn Có nhiều loại enzyme giới hạn mỗi loại nhận biết và cắt tại một vị trí xác
