Đặt vấn đề: Ngộ độc thực phẩm hiện nay liên quan nhiều rất sự ô nhiễm Staphylococcus aureus và độc tố của chúng gây ra trong những năm gần đây. Do đó thiết lập qui trình ELISA để phát hiện độc tố là một nhu cầu cần thiết hiện nay. | TẠO KHÁNG THỂ ĐA DÒNG VÀ XÂY DựNG QUI TRÌNH ELISA TÓM TẮT Đặt vấn đề Ngộ độc thực phẩm hiện nay liên quan nhiều rất sự ô nhiễm Staphylococcus aureus và độc tố của chúng gây ra trong những năm gần đây. Do đó thiết lập qui trình ELISA để phát hiện độc tố là một nhu cầu cần thiết hiện nay. Mục tiêu nghiên cứu Tạo kháng thể đa dòng và khảo sát các thông số kỹ thuật của qui trình ELISA sandwich xây dựng bộ kít phát hiện độc tố ruột nhóm A của Staphylococcus aureus. Phương pháp nghiên cứu Sử dụng các kỹ thuật gây miễn dịch trên thỏ thu nhận kháng thể kỹ thuật tinh chế kháng thể và cộng hợp kháng thể để làm nguyên vật liệu cho nghiên cứu qui trình kỹ thuật ELISA sandwich phát hiện độc tố ruột nhóm A của Staphylococcus aureus. Kết quả nghiên cứu Kháng thể sau khi gây miễn dịch trên thỏ được tinh chế và thu được 700 ũl với nồng độ 16860 ũg ml. Kháng thể này được cộng hợp với enzym HRP và sử dụng để thực hiện quy trình ELISA sandwich với độ pha loãng là lần trong PBS buffer. Các thông số của qui trình ELISA sandwich đối với độc tố ruột nhóm A là - Quá trình phủ giếng Dung dịch phủ giếng là Carbonate buffer pH 9 5. Nồng độ kháng thể kháng độc tố A phủ giếng là 5 ũg ml. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 3 giờ. - Quá trình khóa giếng. Khóa giếng bằng sữa gầy 1 . Ủ ở 4oC trong 30 phút. - Quá trình ủ với độc tố Độc tố được pha loãng trong PBS buffer. Ủ ở 37oC trong 2 giờ. - Quá trình ủ với kháng thể thứ cấp. Kháng thể đánh dấu HRP được pha loãng 1 trong PBS buffer. Ủ ở 25oC trong 1 giờ. - Đọc kết quả Đọc kết quả bằng dung dịch phát màu 2 2 -azino-di 3-ethyl-benzonthiazoline-6-sulfonic acid ABTS ở bước sóng 405nm. - Đánh giá các thông số kỹ thuật của phương pháp mới so với phương pháp tham chiếu với kết quả độ nhạy 100 độ đặc hiệu 93 tỷ lệ âm tính giả 0 tỷ lệ dương tính giả 6 25 và độ tương đồng của thử nghiệm là 95 5 Kết luận Bộ kit có thể dùng để phát hiện độc tố ruột nhóm A của Staphylococcus aureus. ABSTRACT PRODUCTION OF POLYCLONAL ANTIBODIES AND SET UP THE ELISA PROCEDURE
