Kỹ thuật hiển vi huỳnh quang dùng để nghiên cứu các loại mẫu vật, ứng dụng quan trọng trong phương pháp huỳnh quang miễn dịch. | Kĩ thuật hiển vi huỳnh quang Khi các mẫu vật sống hay không sống hữu cơ hoặc vô cơ hấp thụ rồi tái phát xạ ánh sáng quá trình được gọi là hiện tượng phát sáng quang hóa. Nếu sự phát xạ ánh sáng vẫn kéo dài tới vài giây sau khi năng lượng ánh sáng kích thích thôi tác dụng thì hiện tượng được gọi là lân quang. Còn hiện tượng huỳnh quang mô tả sự phát xạ ánh sáng chỉ tiếp tục diễn ra khi đang hấp thụ ánh sáng kích thích. Khoảng thời gian giữa lúc hấp thụ ánh sáng kích thích và lúc tái phát xạ ánh sáng trong hiện tượng huỳnh quang là cực kì ngắn thường dưới một phần triệu giây. Hình 1. Quan sát của Stoke Hiện tượng huỳnh quang được biết đến vào giữa thế kỉ 19. Nhà khoa học người Anh George G. Stoke lần đầu tiên quan sát thấy khoáng vật fluorite biểu hiện huỳnh quang khi được rọi bằng ánh sáng tử ngoại và ông đã đặt ra từ huỳnh quang . Stoke nhận thấy ánh sáng huỳnh quang có bước sóng dài hơn ánh sáng kích thích một hiện tượng trở nên nổi tiếng dưới cái tên sự lệch Stoke. Trong hình 1 một photon bức xạ tử ngoại màu tím va chạm với một electron trong một nguyên tử kích thích và đưa electron lên mức năng lượng cao hơn. Sau đó electron kích thích rơi xuống mức thấp hơn và phát ra ánh sáng dưới dạng một photon năng lượng thấp hơn màu đỏ trong vùng ánh sáng khả kiến. Hình 2 là biểu đồ biểu diễn vùng ánh sáng khả kiến của bức xạ điện từ với bước sóng trải rộng từ xấp xỉ 400 đến 700 nanomét. Bao quanh vùng khả kiến là ánh sáng tử ngoại có năng lượng cao hơn và ánh sáng hồng ngoại có năng lượng thấp hơn. I _ Bứởc sóng khá kiên . . tiv Không nhìn thấy I I Hông ngoại IR Không nhìn thấy 300nm 400nm SOOnm 600nm 700nm 800nm Hình 2. Phổ ánh sáng trắng Hiển vi huỳnh quang là một phương pháp tiên tiến để nghiên cứu vật chất có thể làm cho phát huỳnh quang hoặc dưới dạng tự nhiên gọi là sự tự phát huỳnh quang hoặc huỳnh quang sơ cấp hoặc sau khi xử lí với các hóa chất có khả năng huỳnh quang gọi là huỳnh quang thứ cấp . Hiển vi huỳnh quang là sáng chế vào đầu thế kỉ 19 của August Kor .
