Phương pháp đông khô (Freeze drying/ lyophilization): Đây là phương pháp phổ biến được sử dụng tại mọi bảo tàng vi sinh vật trên thế giới. Phương pháp đông khô hạn chế được sự thay đổi các đặc tính của vi sinh vật và bảo quản được trong một thời gian dài. Phương pháp đông khô được trình bày ở đây là phương pháp được dùng tại NCTC (National Colleciton Type Culture, Anh). 1, Nuôi vi khuẩn cho đông khô: Vi khuẩn được cấy trên môi trường ống thạch nghiêng thích hợp. Tuy nhiên, cũng có thể chuẩn bị dịch vi khuẩn. | Các phương pháp dùng cho bảo quản vi khuẩn và xạ khuẩn Bảo quản vi khuẩn a. Phương pháp đông khô Freeze drying lyophilization Đây là phương pháp phổ biến được sử dụng tại mọi bảo tàng vi sinh vật trên thế giới. Phương pháp đông khô hạn chế được sự thay đổi các đặc tính của vi sinh vật và bảo quản được trong một thời gian dài. Phương pháp đông khô được trình bày ở đây là phương pháp được dùng tại NCTC National Colleciton Type Culture Anh . 1 Nuôi vi khuẩn cho đông khô Vi khuẩn được cấy trên môi trường ống thạch nghiêng thích hợp. Tuy nhiên cũng có thể chuẩn bị dịch vi khuẩn trên môi trường dịch thể nhưng phải làm đậm đặc tế bào bằng li tâm. Tuổi của tế bào cũng rất quan trọng do đó thường chọn tế bào nằm trong pha sinh trưởng log. 2 Chuẩn bị đệm mẫu Có thể dùng một trong hai loại đệm sau Đệm huyết thanh- inositol Meso-inositol 5 gam Huyết thanh ngựa số 3 100 ml Thanh trùng bằng phương pháp lọc vi khuẩn sau đó phân 5ml vào các bình vô trùng. Đệm inositol Môi trường dinh dưỡng bột số 2 gam Meso-inositol 5 gam Nước cất đủ 100 ml. Phân 5 ml vào các bình và khử trùng tại nhiệt độ 121OC. 3 Chuẩn bị dịch tế bào Mật độ tế bào có ý nghĩa quan trọng đối với chất lượng bảo quản. Thông thường có thể thu sinh khối từ mỗi ống thạch nghiêng chỉ dùng cho 1-2 ml đệm pha mẫu để tạo dịch huyền phù tế bào. Mật độ vi khuẩn thông thường cần đạt 1010 đối với vi sinh vật không có bào tử . Mật độ trên có thể giảm với các vi sinh vật có bào tử. Hai đệm pha mẫu trên có thể dùng với mọi vi khuẩn nhưng trong trường hợp enterobacteria thì không dùng đệm huyết thanh vì sẽ gây ra thay đổi đặc tính miễn dịch của vi khuẩn. 4 Chuẩn bị ống đông khô Ông đông khô được rửa sạch sau đó ngâm qua đệm với dịch acid loãng HCl 2 và lại được rửa sạch làm khô và chuẩn bị nút bông ống được thanh trùng khô hoặc khử trùng theo phương pháp thông thường. 5 Chuẩn bị mẫu trước khi đông khô Lượng dịch huyền phù vi khuẩn được đưa cẩn thận bằng pipet pasteur vào ống đông khô khoảng ml. Chú ý mọi thao tác phải
